Effects of depletion of CHRNA5 and/or TP53, and transient and stable overexpression of wildtype or mutant TP53 on expression of DLK1-MEG3 locus in MCF7 cells

CHRNA5 ifadesi akciğer kanseri ve nikotin bağımlılığında önemli bir role sahiptir. Bunun yanı sıra, CHRNA5 deplesyonu meme kanserinde tumor baskılayıcı özlleklikleri ile tanımlanmıştır. Ayrıca CHRNA5 deplesyonunun CDKN1A gen ifadesini arttırdığı ve 14q32.31 lokusunda bulunan miRNA'ları ve DLK1 geninin ifade miktarnı düşürdüğü görülmüştür. Bu çalışmada CHRNA5 tek başına ya da p53 ile birlikte siRNA ile ifadesi azaltıldığında ya da wildtype veya mutant p53 overexpresyonu sonucunda DLK1-DIO lokusunda yarattığı değişimler araştırılmıştır. Bulgularım, CHRNA5 tükenmesinin, TP53 varlığında veya yokluğunda bu lokusta protein kodlayan DLK1 ve protein kodlamayan MEG3 genlerinin ifadesini azalttığını gösterdi. Bu iki gen, tümör baskılanması ve tümör oluşumunda hayati bir role sahip olduğu için bu bulgu, meme kanserinde bu lokustaki gen ifadesinin modülasyonunda CHRNA5'in önemine daha fazla kanıt sağladı. CHRNA5 ve TP53 indüksiyonu arasında bir ilişki olduğundan, ana TP53 düzenleyicilerinden biri olan MDM2'nin ifadesi de incelenmiştir. Daha sonra, CHRNA5 tükenmesinin TP53 tükenmesi ile birleştirilmesinin, hem MDM2 hem de MDM2 ayırma elemanları, PDLIM7 ve CDH18'de ifadesinde önemli bir azalmaya neden olduğu bulundu. Ek olarak, ürettiğimiz stabil MCF7 meme kanseri hücre hatlarında hem vahşi tip hem de mutant TP53 ifade seviyelerinin DLK1-MEG3 lokusu ve CHRNA5 üzerindeki etkileri araştırıldı. CHRNA5 tükenmesi p53 ifadesini indüklese bile, TP53 aşırı ifadesinin, TP53'ün işlevselliğinden bağımsız olarak CHRNA5 indükleyici etkilere sahip olmadığı bulundu. Bununla birlikte, vahşi tip TP53 aşırı ifade eden MCF7 hücrelerinin, DLK1 ifade seviyeleri mutant TP53 aşırı ifade eden hücrelerden farklı bulundu. Gelecekteki çalışmalar, belirli bir TP53 mutasyon durumu için CHRNA5 tükenmesinin DLK1-MEG3 lokusundaki etkilerini netleştirmelidir.