Characterization of functional and molecular properties of circulating extracellular vesicles of childhood idiopathic nephrotic syndrome patients

Nefrotik sendrom çocukluk çağında en sık görülen glomerüler hastalık olup, proteinuri, ödem, hipoalbuminemi ile karakterizedir. Hastalığın patogenezinde en önemli etken podosit hasarı sonucu glomerüler filtrasyon bariyerinin hasar görmesidir. Çocukluk çağında nefrotik sendromun olgularının büyük çoğunluğu steroid yanıtlı nefrotik sendrom (SYNS) olarak tanımlanır ki bu hastalar 4 haftalık steroid tedavisi ile tamamen remisyona girerler ve böbrek biyopsisi ışık mikroskobik incelemesinde belirgin patolojik bulgu yoktur. Daha önceki çalışmalarda SYNS patogenezinde dolaşımda bulunan bir patolojik faktör suçlanmıştır, fakat bu faktör henüz net olarak ortaya konulamamıştır. Hücre dışı kesecikler bütün vücut sıvılarında bulunan ve taşıdıkları protein ve diğer biyolojik aktif moleküller sayesinde birçok hastalık patogenezinde son yıllarda gittikçe daha da çok araştırılan hücre parçacıklarıdır. Bu çalışmada dolaşımda bulunan hücre dışı keseciklerin SYNS patogenezinde rol oynayabileceğini öngördük ve bu keseciklerin özelliklerini ortaya koyarak, in vitro etkilerini araştırmayı amaçladık. Bu amaçla çocukluk çağındaki 20 SYNS hastası, 10 sağlıklı kontrol ve 6 diğer glomerüler hastalığı olan çocukların plazma hücre dışı kesiciklerini izole ederek elektron mikroskopi, akım sitometrisi ve immün blotlama yöntemi ile karakterize ettik. Ayrıca kütle spektormetresi ile proteinlerini tanımlayarak, hastalık aktif dönemde eksprese edilen proteinleri 'Ingenuity Pathway Analysis' veri analizi ile inceledik. Hücre dışı keseciklerin podositler üzerindeki etkilerini insan podosit kültürü ile inceledik. Sonuçlarımız ile SYNS hastalarının dolaşımında bulunan hücre dışı keseciklerinin sayısının ve protein miktarlarının arttığını gözlemledik. Ayrıca bu keseciklerde hastalığın aktif dönemlerinde daha çok aktin ve hücre iskelet düzenlemesi yapan proteinler selektif eksprese ediliyordu. Bu kesecikler podositlerin içine girebiliyor ve podositlerin hareketlenmesine ve albümin geçirgenliğinin artmasına sebep oluyorlardı. Ayrıca bu kesecikler podositlerin daha çok RAC-GTP ve fosforile p38 eksprese etmesine, sinaptopodin miktarının ise azalmasına neden oluyorlardı. Bu sonuçlar neticesinde nefrotik sendrom hastalarının dolaşımında bulunan hücre dışı kesciklerinin biyolojik olarak aktif olduklarını ve in vitro deney ortamında podositlerde hastalık bulgularının ortaya çıkmasına neden olduklarını gösterdik.