Escherichia coli'nin farklı pH'larda fotooksidatif stres altında yaşamı

Genelde koli basili olarak bilinen Escherichia coli, memeli hayvanların kalın bağırsağında yaşayan enterik bakteri türlerinden biridir. Escherichia coli'de çevresel strese (asit şoku, baz şoku, açlık stresi, ozmotik stres, oksidatif stres ve DNA hasarı) karşı hücresel cevapta görevli olan genler eksprese edilmektedir. Bu genler'den arjinin dekarboksilaz adi, glutamat dekarboksilaz gad ve lisin dekarboksilaz cad asit direnç sistemi olarak bilinmektedir. Bu çalışmada, keio koleksiyonundan elde edilen Escherichia coli BW25113 suşlarından hedef 6 gen bölgesi için yabani tip Escherichia coli W3110'a P1kc fajı ile transdüksiyon metodu kullanılarak aktarıldı. Yabanıl tip olan Escherichia coli W3110'dan elde edilen ve adiA, gadB, gadC, cadA, cadB, cadC mutantlarının metilen mavisi ve pH stresinin rolü araştırılmıştır. Ayrıca, aynı yöntemle temin edilen plazmitler aracılığıyla genlerin komplementerlerinin, stres koşullarındaki rolleri kontrol edilmiştir. Yabanıl tip ve mutant suşlarda yaşam deneyleri 2 farklı pH' da (pH-6 ve pH-8), petri plaklarında koloni sayım metodu ile yapılmıştır. pH-6 fosfat tamponunda yabanıl tip ve mutant suşlarda duyarlılık gözlenmeyip sadece pH-8 fosfat tamponunda etkili olduğu gözlenilmiştir. pH 8 metilen mavisi içeren tüm suşlarda 8 saatin sonunda 2 logaritmik düşüşün olduğu ancak en fazla azalmanın adiA mutantında görüldüğü, başlangıç değeri olan 6,59 logaritma değerinin 6 saat sonunda 2,25'e düştüğü belirlenmiş ve t99 değeri 2,76 saat olarak hesaplanmıştır. Yaşam süresi çoktan aza doğru olarak cadA>gadC>cadC>gadB>cadB>adiA mutantları olarak belirlenmiştir. Metilen mavisinin pH 6 fosfat tamponunda etikili olmadığı görülürken, pH 8 fosfat tamponu ortamında yabanıl tipte ve bütün gen bölgelerinde etkili olduğu görülmüştür. Bu sonuçlar adiA, gadB, cadB ve cadC mutantlarının pH stresi ve metilen mavisi ile ilişkili olduğunu göstermektedir.