Escherichia coli replikatif DNA polimeraz IIIα (DnaE)' ye inhibisyon etkili bitki organ özütlerinde fenolik bileşiklerin HPLC-DAD ile aydınlatılması

Bu yüksek lisans tezinde 11 bitkinin replikatif DNA polimeraz inhibisyonu, antimikrobial aktivite ve bazı kimysal içerikleri çalışılmıştır. Bitkilerden bazılarının tamamı, bazılarının meyve, yaprak, çiçek kısımları kullanıldı. Replikatif bakteriyal DNA polimeraz olarak Escherichia coli (E. coli) replikatif DNA polimeraz IIIα (DnaE) seçildi ve rekombinant üretildi. Bunun için DnaE'i kodlayan gen PZR ile çoğaltıldı ve pET-100 TOPO vektörüne klonlandı. Ni-afinite ile saflaştırıldı. 11 bitkinin metanol ve DMSO özütleri hazırlandı. Metanol özütleri DnaE karşı inhibisyonun belirlenmesi için primer uzatma deneylerinde kullanıldı. Bu amaçla sentetik olarak dizayn edilen ve florojenik primer ihtiva eden 45/20-mer DNA kullanıldı. Rosa canina bitkisinin çiçek kısmının DnaE üzerinde güçlü bir şekilde inhibisyon gösterdiği belirlendi. Sorbus caucasica ve Sorbus aucuparia bitkilerin yaprak ve meyvelerinin de inhibisyon gösterdiği belirlendi. Sorbus aucuparia (meyve, yaprak), Sorbus caucasica (meyve, yaprak) ve Rosa canina (çiçek, meyve) DMSO ekstraktlarının gram (+) ve gram (-) bakteriler üzerine antimikrobiyal testi yapıldı. Sorbus türlerinin ekstraktlarında gram (+) bakteriler üzerinde antimikrobiyal aktivitesi olmadığı gözlendi. Rosa canina meyve özütlerinin gram (+) ve gram(-) olmak üzere bu iki grup bakteri üzerinde antimikrobiyal aktivitesi olduğu belirlendi. İnhibisyon görülen bitkilerin metanol ekstraktları sıvı-sıvı ekstraksiyon yöntemi ile sulu ortamda sırasıyla dietil eter, etil asetat, bütanol ve kalan sulu kısım olmak üzere dört ayrı fraksiyona ayrıldı ve ardından HPLC-DAD ile bu ekstraktların fenolik bileşikleri aydınlatıldı. Rosa canina bitkisinin çiçek ve meyve özütlerinde gallik asit ve gallik asitin türevi olan ellacik asit bulundu. Sorbus aucuparia ve Sorbus causacisa bitkilerinin yaprak ve meyve özütlerinde klorojenik asit ve rutin bileşikleri bulundu.