Investigation of the interaction between mouse cryptochrome-1 and leptin receptor overlapping Transcript Like-1

Sirkadiyen ritimler organizmaların biyokimyasal, fizyolojik ve davranışsal fonksiyonlarında meydana gelen yaklaşık 24 saatlik salınımlardır. Sirkadiyen saatler uyku/uyanıklık döngüsü, beslenme, hormon salınımı ve başka birçok metabolic süreçleri etkilerler. En önemlisi, sirkadiyen ritimde görülen bozulmalar jet-lag, depresyon, obezite ve kanser gibi birçok metabolik ve fizyolojik hastalıklara sebebiyet verebilirler. Memelilerde, sirkadiyen saatler otoregülasyonlu transkripsiyonal translasyonel geri besleme dögüleri ile sürdürülürler. Bu otoregülasyonlu transkripsiyonal translasyonel geri besleme dögüleri basit helix-loop-helix PER-ARNT-SIM (bHLH/PAS) transkripsiyon faktörleri BMAL1/CLOCK ve NPAS2 proteinlerini içerirler. BMAL1, CLOCK ya da NPAS2 ile heterodimerizasyon yapıp, hedef genlerdeki E-Box motifleri aracılığı ile bu genlerin transkripsiyonunu sağlarlar. Bu hedef genlerden olan Period homologlar (Per1-3), Cryptochrome'lar (Cry1-2) ve Rev-erbα, BMAL1:CLOCK/NPAS2 transkripsiyonunu baskılarlar. Bir sürelik gecikmeden sonra, üretilen PER ve CRY proteinleri zaman içerisinde parçalanırlar, böylelikle sirkadiyen devir ikinci devrine yeniden başlar. Bu negatif geri besleme gen ifadelerinde yaklaşık 24 saatlik devir oluştururlar. Yapılan çalışmalar bu geri besleme sistemini yöneten başka birçok bileşenin olduğunu göstermektedir. Örneğin Naif Bayez yaklaşımı ile yapılan bir çalışmada saat fonksiyonuna merkezi saat bileşeni ya da düzenleyici olarak katkıda bulunan birçok farklı bileşenlerin olduğu işaret edilmektedir. Bu çalışmanın bir devamında biz Leptin Receptor Overlapping Transcript Like-1 (Leprotl1) proteininin CRY1 proteini ile etkileşim halinde olduğunu gösterdik. Bu tez çalışmasında, CRY1 ve CRY2 proteininin C' terminus ucu ile LEPROTL1 proteininin etkileşim halinde olduğunu memeli iki-hibrid analizi ile gösterdik. Bu etkileşim ayrıca co-immunopresipitasyon tahlili ve iki-moleküllü floresanlı tamamlama (BiFC) ile de doğrulandı. vii LEPROTL1 organizmalarda metabolik fonksiyonları olan bir proteindir. Önceki çalışmalarda LEPROTL1'in hepatic leptin ve büyüme hormonu duyarlılığında görev aldığı gösterilmiş olup, bu proteinin sirkadiyen saat ile olan bağlantısı bilinmemektedir. Bu çalışmada gösterilen LEPROTL1'ın fare CRY1 ve CRY2 proteinleri ile olan etkileşimi, memelilerde metabolik denetlenmenin sağlanmasında bir rol alabilir.