Detection of C-ABL tyrosine kinase and the mammalian target of rapamycin (MTOR) regulation in mouse oocyte maturation

Bu tez çalışmasında, oosit gelişiminin Profaz I (PI), Metafaz I (MI) ve Metafaz II (MII) aşamalarını içeren oosit olgunlaşma sürecinde mTOR ve c-Abl'in rollerini ve mTOR ile c-Abl arasındaki ilişkiyi araştırmayı amaçladık. GV aşamasındaki oositler fare ovaryum dokusundan izole edilerek, c-Abl inhibitörü olan imatinib (1 µM, 5 µM ve 10 µM) ve mTORC1 inhibitörü olan rapamisin (1000 µM) ile 16-18 saat inkübe edildi. Oosit kültürü sonrası GV, MI ve MII oranlarını kaydettik ve oositleri skorladık. Ayrıca tüm deney gruplarında kültür sonrasında GV ve MI aşamasında duraklayan oositler ile MII aşamasındaki oositlerde mTOR ve c-Abl ekspresyonunu qRT-PCR yöntemi ile mRNA düzeyinde belirledik. Rapamisinin, oosit olgunlaşmasını hızlandırdığını ancak oosit morfolojisi üzerinde olumsuz bir etkiye sahip olduğunu gözlemledik. 1 μM imatinib uygulamasının, oositin olgunlaşması ve morfolojisi üzerinde olumsuz bir etkiye sahip olduğunu belirledik. 5 μM imatinib uygulamasının, oosit olgunlaşması ve oosit morfolojisi üzerinde olumsuz bir etkiye sahip olduğunu gözlemledik. 10 μM imatinib uygulamasının, oosit olgunlaşması ve oosit morfolojisi üzerinde büyük ölçüde olumsuz bir etkiye sahip olduğunu değerlendirdik. 1 μM ve 5 μM imatinib tedavi gruplarında c-Abl ekspresyonunun GV ve MII'de aşamasındaki oositlerde önemli ölçüde azaldığı belirlendi. c-Abl ve mTOR ekspresyonunu tüm deney gruplarında GV, MI ve MII aşamasındaki oositlerde değerlendirdiğimizde, c-Abl'i inhibisyonu sonucu mTOR ekspresyonun arttığını belirledik. Tez çalışmamızın sonucunda, mTOR ve c-Abl'in oosit olgunlaşmasında önemli rollere sahip olabileceğini ve c-Abl ile mTOR arasındaki ilişki neticesinde c-Abl inhibisyonunun mTOR ekspresyonunun artmasına neden olabileceğini belirledik. Sonuç olarak, oosit olgunlaşması sürecinde c-Abl ve mTOR'un rollerinin ortaya koyulması, oosit ve embriyo kalitesini iyileştirmemize yardımcı olacağını ve ayrıca oosit olgunlaşmasının düzenlenmesi sürecinde görev alan mekanizmalar hakkında yeni bilgiler sağlayacağını düşünmekteyiz. Anahtar Kelimeler: c-Abl, mTOR, oosit olgunlaşmas, fare