Fasciola hepatica cathepsin l2 geninin klonlanması ve DNA dizilemesinin belirlenmesi

Fasciolosis Fasciola hepatica'nın insan ve hayvanlarda neden olduğu paraziter birhastalık olup tüm dünyada ve Türkiye'de sık görülmektedir. Elazığ ve çevresinde isesporadik olgular şeklinde görülmekte olup sağlıklı bireylerde fasciolosis seroprevalansının%2.78 olduğu bildirilmektedir.Fasciolosisin kesin tanısı dışkıda yumurtaların saptanması ile yapılmaktadır. Ancakhastalığın akut döneminde, ektopik yerleşimlerde ve yalancı parazitlik durumlarında bumümkün olmamakta ve serolojik testler kullanılmaktadır.Fasciola hepatica'nın ekskretuvar-sekretuvar antijenlerinin büyük bir bölümünüoluşturan proteazlar F. hepatica'ya özgül olmaları ve antijenik yapıları nedeniyle tanıyöntemlerinde ve korunma amcıyla immünizasyon çalışmalarında kullanılabilecekpotansiyel bir moleküldür. Bu çalışmada F. hepatica cathepsin L2 geninin klonlanması vegen dizilmesinin belirlenmesi amaçlanmıştır.Bu çalışmada doğal olarak infekte sığır karaciğerinden elde edilen F. hepatica'dantoplam RNA elde edildi ve RNA'dan cathepsin L2 cDNA oluşturuldu. PZR ile çoğaltılancathepsin L2 cDNA pGEM-T Easy vektörüne yerleştirildi. Oluşturulan ve pGEM-T CL2olarak adlandırılan rekombinant vektör kompetan JM109 E. coli hücrelerine transfekteedilerek cathepsin L2 klonlandı. JM109 E. coli kolonilerinden PZR tarama ile elde edilencathepsin L2 cDNA %1.1'lik agaroz jelde yürütülerek gösterildi. Cathepsin L2 cDNA'nınnükleotid dizilemi ve soy ağacı belirlendi.Fasciola hepatica cathepsin L2 Türkiye'de ilk kez klonlanmış olup belirlenennükleotid dizilemi literatürde bildirilen ikinci F. hepatica cathepsin L2 nükleotiddizilemidir. Daha önce Dowd ve ark. tarafından bildirilen F. hepatica cathepsin L2 (genbank no: U62289) ile %99 benzerlik gösterdiği belirlenmiştir.Anahtar kelimeler: F. hepatica, cathepsin L2, klonlama, nükleotid dizilemi, soyağacı