Glutatyon S-transferaz (GST) enziminin japon bıldırcın (Coturnix coturnix japonica) karaciğerinden saflaştırılması ve karakterizasyonu

Bu çalışmada, glutatyon S-transferaz (GST; EC 2.5.1.18) enzimi bıldırcın karaciğerinden amonyum sülfat çöktürmesi ve glutatyon-agaroz afinite kromatografisi kullanılarak 15,86 EÜ/mg protein spesifik aktivite ile %12,36 verimle 46,1 kat saflaştırıldı. Enzim saflığını kontrol etmek ve alt birim molekül kütlelerini belirlemek amacıyla SDS-PAGE yapıldı ve tek bant elde edildi. Bıldırcın karaciğerinden saflaştırılan GST enziminin alt birim molekül kütlesi yaklaşık olarak 25,1 kDa belirlendi. Bıldırcın karaciğerinden saflaştırılan GST enzimi için yapılan karakterizasyon çalışmalarında; optimum pH, Tris-HCI tamponu pH=8,5, optimum iyonik şiddet, Tris-HCI tamponu 1,4 M, stabil pH, Tris-HCI tamponu pH = 8,5 ve optimum sıcaklık 55oC olarak bulundu. Saf enzime ait KM ve Vmax değerleri Lineweaver-Burk grafiklerinden faydalanılarak GSH substratı için KM, 0,114 mM, Vmax 0,672 EÜ/mL; CDNB substratı için KM, 0,048 mM, Vmax, 0,047 EÜ/ mL olarak hesaplandı. Anahtar Kelimeler: Glutatyon S-transferaz, bıldırcın karaciğeri, saflaştırma, karakterizasyon.