Advancements in gluten detection: Antibody development and gold nanoparticle conjugation for a lateral flow immunoassay

Amaç: Çölyak hastalığı gibi glütenle ilişkili rahatsızlıklar, küresel nüfusun %5'ini etkilemekte olup, çölyak hastalığı tek başına bireylerin %1,4'ünü etkilemektedir. Çölyak hastalığı olan kişilerde glüten tüketimi bağırsaklarda iltihaplanmayı tetikler. Çapraz bulaşma gibi zorluklara rağmen glütensiz bir diyet uygulamak çok önemlidir. ELISA ve LFIA gibi immünolojik testler, basitlikleri ve uygun maliyetleri nedeniyle glüten tespitinde tercih edilmektedir. LFIA kitleri, gıdalardaki glüteni analiz etmek için taşınabilir bir seçenek sunmaktadır. Güvenilir glüten tespit yöntemlerine olan talep, hem gıda üreticileri hem de glütenle ilişkili rahatsızlıkları olan bireyler için doğru çözümlere duyulan ihtiyacı vurgulamaktadır. Araştırmamız, gıdalarda glüten bulunmadığını doğrulamak için glütenin ana bileşenlerinden biri olan gliadini hedefleyen antikorlar kullanan özel teknikler geliştirmeye odaklanmaktadır. Yöntem: Tavşanlardan elde edilen poliklonal antikorlar saflaştırıldı ve ELISA ve Western blot teknikleri kullanılarak gliadine karşı reaktiviteleri test edildi. Daha sonra, pH ve antikor konsantrasyonu ile optimal koşullar belirlenerek altın nanopartiküllerle konjuge edildi. LFIA'nın buğday gliadinini tespit etmedeki etkinliği, tespit limiti de dahil olmak üzere araştırıldı. Farklı gıda örneklerinden gliadin ekstrakte edilip analiz edildi ve farklı ürünlerde gliadini tespit etmek için güvenilir bir yöntem oluşturuldu. Bulgular: Üç tavşandan (R1, R2 ve R3) elde edilen antikorlar, ELISA testinde gliadine duyarlıydı. Western blot analizi, bu antikorlarda ortak gliadin-spesifik epitopları doğruladı. Glütensiz gıda örneklerine tepki vermediler. LFIA, seçilen bir membran ve lifler kullanarak buğday gliadinini etkili bir şekilde tespit etti ve tespit limiti 50 µg/mL idi. LFIA, farklı gıda kaynaklarından alınan örnekleri test ederken tutarlı ve güvenilir sonuçlar verdi. Sonuç: Çalışmamız, antikorların geliştirilmesi, altın nanopartikül bağlanmasının iyileştirilmesi ve güvenilir bir LFIA protokolü oluşturulması da dahil olmak üzere glüten tespiti için bir teknik sunmaktadır. Bu metodoloji, gıda güvenliğinin ve glüten analizinin kolaylaştırılması potansiyeline sahiptir. Anahtar Kelimeler: Antikor geliştirme, Antikor konjugasyonu, Lateral akış immünoanalizi