HANEIN-1, a novel conserved eukaryotic protein ubiquitously expressed in human tissues

HANEIN-1 Na+/I- simporter geninin 3' regulasyon elementleri araştırılırken keşfedilen yeni bir gendir. Bu yeni protein bütün ökaryot canlılarda korunmakla birlikte, bilinen hiçbir proteinle ortak işlevsel bölgelere sahip değildir. Veritabanlarında kıvrım-kıvrım (coiled-coil) bölge içeren-124 hipotetik proteini olarak tanımlanmakta ve 223 amino asit içeren bir protein olduğu tahmin edilmektedir. Bu projededeki amaç HANEIN-1 proteinini çeşitli biyoinformatik ve biyokimyasal analiz yöntemleriyle karakterize etmekti. HANEIN-1 proteinin amino acid dizi benzerliği analizi, bu proteinin memelilerde %75, böcek ve nematodlarda ise % 50 oranında korunduğunu gösterdi. Gen ifade analiz yöntemleri ile HANEIN-1 ifadesinin en fazla iskelet kasında olduğu tespit edildi. Bunun yanı sıra, northern blot analizi ile HANEIN-1 transcript büyüklüğü yaklaşık 1000 bp olarak belirlendi. Western blot tekniği ile protein düzeyinde yapılan çalışmalar, HANEIN-1 geninin 33 kDa büyüklüğünde bir proteini kodladığını ve proteini N-son ucu ve C-son ucu Flag epitopu ile işaretlemenin protein stabilitesini farklı şekilde etkilediğini gösterdi. Laboratuvarımızda yapılan maya ikili-hibrid deneyleriyle, HANEIN-1 proteinin henüz tam olarak karakterize edilmemiş, bir guanin nükleotit değişim faktörü (Guanine Exchange Factor) olan RASGEF1B proteiniyle etkileştiği bulunmuştur. Gen ifade analizleri RASGEF1B ve HANEIN-1 ifade profilleri arasında ters bir bağlantı olduğunu göstermiştir. Son olarak, serin-tarayıcı mutasyon analizleriyle, 194. konumdaki serin mutasyonunun protein stabilitesini önemli ölçüde değiştirdiği saptanmıştır.