Fare kemik iliği kökenli mezenkimal kök hücrelerinde çoğalmayı indükleyen küçük moleküllerin identifikasyonu

Mezenkimal kök hücreler (MKH), immüno modülatör özellikleri (immün sistemi kontrolü), homing yetenekleri (hasarlı bölgelere göç edebilme) ve farklılaşma kapasiteleri ile transplantasyon-terapileri için çok önemli bir aday haline geldiler. MKH'ler yetişkinlerde bulunan, multipotensi özelliği gösteren ve kendini yenileme kabiliyetine sahip hücrelerdir. Kemik iliği, adipoz dokusu, kordon, dental doku dahil olmak üzere bir çok dokudan izole edilebilirler. Ancak, mobilizasyon, ekpansiyon ve farklılaşma kapasitelerinin anlaşılması konularında bir çok soruna rastlanmaktadır. Eğer bu sorunların üstesinden gelinebilirse, deneysel ve klinik çalışmalar için çok önemli bir aday haline gelebilirler. Çalışmamızda, fare kemik iliğinden izole edilen MKH'leri küçük moleküller ile çoğaltmaya odaklandık. Ayrıca küçük molekül muamelesi sonrası mobilizasyonda da artış görmeyi umduk. Öncelikli olarak, WST-1 denemeleri ve Hoechst boyamaları sonucunda dört etkin molekül seçildi; SKF96265, SB203580 (p38-MAPK İnhibitörü), GSK-3 İnhibitörü ve StemReginin I (AhR Antagonist). Hücre mekanizmalarında etkilerini görmek için, hücre döngüsü (DAPI ve Hoechst boyamaları) ve apoptoz analizleri (Annexin V-FITC ve PI boyamaları) yapıldı. Kontrolle (DMSO) karşılaştırıldığında, SKF96265 ile muamele edilmiş MKH populasyonu haricinde sonuçlarda herhangibir olumsuz etki görülmedi. SKF96265 (CCE İnhibitörü) hücrelerin G1 fazında duraklamaya neden oldu ve yüksek ölüm oranları gözlendi. Sonrasında, HDR, CDKI ve S-Fazı genlerindeki değişimleri görmek için RT-PZR yapıldı. SKF96265'in RAD51 ve PCNA HDR gen ekspresyonlarını anlamlı bir şekilde arttırdığı görüldü. İlk seçilen molekül olan GSK-3 inhibitörü serbest sitozolik β-katenini stabilize ederek farklılaşmayı engellemektedir. SB203580 ise p38-MAPK yolağına özgü bir inhibitördür ve seçilenler arasından en etkili molekül olduğu gözlemlenmiştir. Sonuç olarak, bu çalışma ile murin kemik iliği kökenli MKH'lerin in vitro'da çoğaltılması için sağlam ve güvenilir bir yöntemin temelleri atılmıştır. İleride, etkili küçük moleküllerden yapılan kokteyllerin denenmesi, immüno modülasyon ve GvHD için küçük moleküllerle muamele edilmiş MKH'ler ile in vivo çalışmalar yapılabilir. Temel amaç, bu bilgileri klinik alanda kullanabilir hale getirmektir.