Generation of induced pluripotent stem cells from human fibroblast cell lines

Amaç: İndüklenmiş pluripotent kök hücreler (iPKH'ler), her üç germ tabakasına ait hücrelere farklılaşabilme ve kendini sürekli yenileyebilme yetenekleri ile dikkat çeken, insan biyolojisinin in vitro modellenmesinde ve gen ve hücre tedavilerinde çok önemli potansiyel atfedilen hücrelerdir. Ancak iPKH oluşturma süreçleri, etkinliği düşük ve uzun süreli kültür gerektiren metodolojilerdir ve etkinlik ve güvenlilik açısından geliştirilmeleri gerekmektedir. Çalışmamızda, HFF-1 insan fibroblast hücrelerinin yeniden programlama faktörlerini kodlayan entegre olmayan lentiviral vektörler (integrase-deficient lentiviral vectors; IDLV-OSK'lar) aracılığıyla ve etkinliği artırıcı küçük molekül sodyum butirat desteği ile iPKH'lere yeniden programlanmasını hedefledik. Yöntem: Çalışmamızda, HFF-1 fibroblast hücrelerinin pluripotensiye yeniden programlanması amacıyla, Oct4, Sox2 ve Klf4 transkripsiyonel regülatörlerini kodlayan IDLV-OSK vektörler kullanıldı. Viral vektörün yanı sıra, epigenetik modülatör destek molekül olarak histon deasetilaz inhibitörü olan sodyum butirat protokole dahil edildi. Uygulanan yeniden programlama protokolümüz ile 9-12 gün içinde pasajlanabilir koloniler elde edildi. Elde edilen iPKHler, morfolojik karakterizasyonun yanı sıra hücre yüzeyinde ifade edilen (alkalin fosfataz, Tra-1-81, Tra-1-60) ve nüklear konumlu (Oct4, Klf4, c-myc, Nanog) pluripotensi belirteçlerinin ekspresyonları ile karakterize edildi. Bulgular: Tez çalışmamızda, IDLV-OSK'lar kullanılarak ve histon deasetilaz desteği ile iPKH'ler elde edildi. Elde edilen koloniler, beklenen morfolojik özellikleri sergiledi. Kolonilerde yüzey ve nüklear pluripotensi belirteçlerinin ekspresyonları gösterildi. Sonuç: Çalışmamızda IDLV-OSK vektör sistemi ve sodyum butiratın birlikte kullanıldığı geriye programlama yaklaşımı, farklı hücrelerin etkin ve güvenlilik potansiyeli yüksek bir metodoloji aracılığıyla geriye programlanarak in vitro modelleme ve deneysel terapötik çalışmalarda kullanılma potansiyeli açısından önemlidir. Anahtar Kelimeler: İndüklenmiş pluripotent kök hücre, Sodyum bütirat, Lentiviral vektör