Immobilization of his-tagged human kappa opioid receptor on a cantilever array biosensor for detection of narcotics in bodily fluids

Biyosensörler, kimyasal ve biyolojik moleküller arasındaki etkileşimleri gözlemlemek ve yeni molekülleri bulmak üzere kullanılabilecek önemli cihazlardır. Biyolojik moleküllerin yüzeye sabitlenmesi, biyosensör üretiminde krtitik rol oynamaktadır. Bu çalışmada, insan ? opioid almaçlarının (hKOR) biyosensör alanında yeni bir uygulama olan insan vücut sıvılarından uyuşturucu tayini yapılması amacıyla yüzey işlevselleştirilmesi gerçekleştirilmiştir. Bu amaçla, almaçlar ilk olarak ifade vektörlerine klonlanıp Escherichia coli'de ifade ettirilmiştir. Daha sonra, rekombinant hKOR affinite kromatografi yöntemi ile saflaştırılıp, biyosensör yüzeyine tiyol ve Ni-NTA grupları aracılığı ile sabitlenmiştir. Başarıyla yüzeye sabitlenen almaçlar flurosan mikroskobu ile görüntülenmiştir. Altı histidin ile işaretlenmiş hKOR ve histidin antikoru arasındaki protein- antikor etkileşimi doğrudan ve etiket gerektirmeyen bir yöntemle gösterilmiştir.