K562 hücre hattında prime editing yöntemiyle t315ı mutasyonunun oluşturulmasına yönelik yeni moleküler yaklaşım

Kronik Miyeloid Lösemi (KML), BCR-ABL1 füzyon proteininin sürekli tirozin kinaz aktivitesi ile karakterize edilen bir hematopoietik malignitedir ve tyrosine kinase inhibitörleri (TKI) ile tedavi edilmektedir. Ancak, TKI tedavisi sırasında bazı hastalarda direnç gelişmekte ve bu direnç sıklıkla BCR-ABL1 geninde meydana gelen nokta mutasyonlarına bağlıdır. Bu mutasyonlar, TKI bağlanmasını engelleyerek tedavi etkinliğini düşürmekte ve hastalığın progresyonunu hızlandırmaktadır. Bu tez çalışmasında, K562 hücre hattında KML'de en sık gözlenen ve TKI tedavisine direnç sağlayan T315I mutasyonu, prime editing teknolojisi kullanılarak modellenmiştir. Çalışmada iki farklı metodoloji uygulanmış olup, bunlardan biri araştırmacılar tarafından geliştirilmiş ve çift floresan marker tabanlı zenginleştirme stratejisini içermektedir. Bu yeni metodoloji, hedef hücrelerin görsel olarak izlenmesine ve direnç geni taşıyan hücrelerin seçilmesine olanak sağlayarak edit verimliliğini artırmaktadır. Elde edilen veriler, geliştirilen stratejinin önceki metodolojiye kıyasla belirgin bir edit oranı artışı sağladığını göstermektedir. Bu yöntem, KML'ye özgü mutasyonların güvenilir bir şekilde in vitro modellenmesine olanak tanırken, transfeksiyon veriminin sınırlı olduğu veya hücresel heterojenliğin yüksek olduğu sistemlerde de prime editing verimliliğini artıracak bir platform sunmaktadır. Böylece, geliştirilen metodoloji hem temel araştırmalar hem de gelecekteki fonksiyonel ve terapötik çalışmalar için değerli bir araç olarak değerlendirilebilir.