Kaldirik (Trachystemon orientalis) bitkisinden polifenol oksidaz enziminin kısmi saflaştırılması ve karakterizasyonu

Bu çalışmada, Trachystemon orientalis (Kaldirik) bitkisinden ekstrakte edilen Polifenol oksidaz (PPO) enzimi jel filtrasyon kromatografisiyle kısmi olarak saflaştırılmıştır. Yapılan karakterizasyon çalışmalarında ham enzim ekstraktı kullanılmıştır. Enzim monofenolaz aktivitesi göstermemekle birlikte difenolaz ve trifenolaz aktivitesine sahiptir. Katekol, 4-metil katekol, kafeik asit ve pirogallol substratlarına karşı aktivite gösteren enzimin kafeik asit substratına karşı etkinliği en fazladır. Enzimin optimum pH ve sıcaklık değerlerinin substrata göre farklandığı görülmüştür. Optimum pH değeri katekol ve pirogallol için 7,5; 4-metil katekol için 5,0; kafeik asit için ise 5,5'dur. Optimum sıcaklık değerleri ise katekol için 10C,4-metil katekol için 5°C, kafeik asit için 20C ve pirogallol için 30C'dir. Pekçok PPO enzimi üzerinde şiddetli inhibisyon etkisi yaratan kalay ve kurşun metallerine ve sodyum azid inhibitörüne karşı kaldirik PPO enziminin dayanıklı olduğu tespit edilmiştir. Asidik, bazik ve nötral aminoasitlerle gerçekleştirilen inhibisyon denemelerinde, denenen tüm aminoasitlerin enzimi inhibe ettiği ve en yüksek inhibisyon etkisini asidik aminoasitlerin yarattığı belirlenmiştir. Ayrıca yapılan termal inaktivasyon ve depolanma kararlılığı çalışmaları da enzimin diğer bitki kaynaklı PPO enzimlerine göre daha dayanıklı olduğunu göstermiştir.