Karahindiba (Taraxacum officinale) bitkisinden süperoksit dismutaz ve peroksidaz enzimlerinin karakterizasyonu

Peroksidaz (POD; EC 1.11.1.7), hidrojen peroksitin ve hidrojen atomlarının donörüolarak rol yapan başka bir bileşiğin de bulunduğu bir reaksiyonu katalize eden birenzimdir.Süperoksit dismutaz (SOD; EC 1.15.1.1), süperoksit radikallerinin hidrojen peroksitedismutasyonunu katalize eden bir enzimdir.Çalışmamızda peroksidaz (POD) ve süperoksit dismutaz (SOD) enzimleri, Sakaryabölgesinde yetişen karahindiba (Silybum marianum) bitkisinden ekstrakte edilmiştir.Elde edilen ekstrakte, peroksidaz enziminin karakterizasyonu için kullanılmıştır.Karakterizasyon çalışmalarında 4-metil katekol - H2O2, ABTS - H2O2, gallik asit-H2O2, guaiakol - H2O2, kafeik asit - H2O2, o-dianisidin - H2O2, o-fenilen diamin -H2O2, progallol ? H2O2, katekol - H2O2 substrat çiftleri kullanılarak her bir substratiçin ayrı ayrı optimum pH ve sıcaklık değerleri belirlenmiştir. Her bir substrat çiftiiçin 420 nm'de UV spektrofotometre cihazında aktivite tayinleri yapılmıştır. Enziminoptimum pH'ı 3,0 ? 9,0 arasında değiştiği bulunmuştur. enzimin optimum sıcaklığıise 30 ? 40 oC arasında değiştiği bulunmuştur. Ayrıca her bir substrat çifti içinLineveawer-Burk grafiklerinden Km ve Vmax değerleri ayrı ayrı hesaplanmıştır. Kmdeğerleri değerlendirilerek POD substrat spesifikliği bulunmuştur. Peroksidazenziminin substrat spesifikliği büyükten küçüğe doğru kafeik asit, ABTS, odianisidin,gallik asit, progallol, o-fenilen diamin, 4-metil katekol, katekol veguaiakol sırasını takip etmiştir. Bu çalışmada sekiz adet inhibitör ile çalışılmış olupetkili olanların yarışmalı inhibitör olarak sodyum azid, tiyoüre, askorbik asit, 2-merkapto etanol, L-Glutatyon ve L-Sistein, yarı yarışmalı olarak potasyum siyanür,yarışmasız olarak ise sodyum sülfit olduğu bulunmuştur. Süperoksit dismutaz enzimiiçin optimum pH'ının 7,6 olduğu bulunmuştur. Enzimin optimum sıcaklığının ise20°C olduğu bulunmuştur.Anahtar kelimeler: Peroksidaz, süperoksit dismütaz, karahindiba, antioksidanenzimler, serbest radikaller