Koyun eritrositleri ve göz lensinden glukoz-6-fosfat dehidrogenaz enziminin saflaştırılması, karakterizasyonu, bazı ilaç ve kimyasal maddelerin inhibisyon veya aktivasyon kinetiklerinin incelenmesi

Glukoz-6-fosfat dehidrogenaz (D-glukoz-6-fosfat: NADP+ oksidoredüktaz, EC 1.1.1.49; G6PD) koyun eritrositleri ve lensinden saflaştırıldı. Saflaştırma işlemi, hemolizatın veya homojenatın hazırlanması, amonyum sülfat çöktürmesi ve 2', 5'-ADP Sepharose 4B afinite kromatografisi olarak üç basamaktan oluştu. Eritrosit ve lens G6PD enzimleri sırasıyla % 37,1 ve % 66,8 verimle, spesifik aktiviteleri 4,64 ve 7,8 U/mg olarak elde edildi. Bu iki enzim için optimal pH, stabil pH, NADP+ ve G6P substratlan için Km ve Vmax değerleri belirlendi. Tüm saflaştırma işlemleri sonunda koyun eritrosit G6PD enzimi 1189,74 kat ve lens G6PD enzimi 10.400 kat saflaştınldı. Jel filtrasyon kromatografisi yapılarak yaklaşık olarak koyun eritrosit G6PD'nm MA' sı 1 19.662 dalton ve lens G6PD'nın MA'sı 56.099 dalton olarak belirlendi. SDS poliakrilamid jel elektroforezi (SDS-PAGE) ile koyun eritrosit ve lens G6PD'nın alt birim MA'ları sırasıyla 66.880 dalton ve 54.957 dalton olarak belirlendi. Enzim aktiviteleri spektrofotometrik olarak 340 nm'de Beutler metoduna göre ölçüldü. Ayrıca, koyun eritrosit ve lens G6PD enzimlerinin akiviteleri üzerine bazı ilaçların in vitro etkileri araştırıldı 2002, 135 sayfa Anahtar kelimeler: Glukoz-6-fosfat dehidrogenaz, ilaç, koyun, eritrosit, lens