Molecular cloning, characterization and comparison of bile salt hydrolase enzyme from Lactobacillus gasseri

Geçtiğimiz on yıl içinde, aktif safra tuzu hidrolaz (STH) enzimi taşıyan probiyotikler hiperkolesterolemi temelli hastalıkların tedavisinde kullanılmaktadır. BSH enziminin safra tuzlarını sebest safra asitlerine ve glisin veya taurin amino asitlerine dönüştürme yeteneği, bu STH enziminin probiyotik seçiminde önemli bir kriter oluşturmaktadır. Bu dekonjugasyon sadece bakterilerin gastro intestinal sistemde hayatta kalabilmesi için tolerans sağlamaz, aynı zamanda insan konakçısının kan kolesterol düzeyinin azaltılmasında önemli bir rol oynar. Bu nedenle, tedavilerde kullanılan probiyotiklerin ve safra tuzu hidrolaz enzimlerin etki mekanizmasının bilinmesi ve anlaşılması önemlidir. Lactobacillus gasseri muhtemelen piyasadaki en yararlı probiyotiklerden biri olsa da, bu mikroorganizmanın STH enziminin katalitik aktivitesi ve substrat tercihleri etki mekanizması ile ilgili çok az bilgi bulunmaktadır. Bu çalışmada, Lb.gasseri ATCC 33323 suşundan elde edilen sth geninin Escherichia coli BLR(DE3) suşuna klonlanmış, ifade edilmiş ve tanımlanmış. Bu yaban tip rekombinan STH (yrSTH) enzimin hidroliz aktivitesi 25°C ile 65°C arasında değişen farklı sıcaklıklarda ve 4.0 ile 8.0 pH aralıklarında yapılan altı farklı safra tuzunun kullanıldığı ninhydrin testleri araştırlmıştır. Yrsth geminin ifadesi ise SDS-PAGE ile belirlenmiştir. Ninhidrin test sonuçları, yrSTH enziminin altı temel insan safra tuzunu hidroliz etmekle birlikte taurine ekli tuzlardan ziyade glisin ekli tzları daha fazla tercih ettiklerrini göstermektedir. yrBSH enziminin maksimum aktiviteleri düşük pH ve yüksek sıcaklıklarda kaydedildi. Elde edilen bulgular, STH enzimleri substratlarını kolat ekinden ziyade aminoasit eklerine göre tanımaktadır önerisini desteklemektedir. Bununla birlikte, STH enziminin katalitik aktivitesi, substrat özgüllükleri ve probiyotk bakteri seçi kriterlerinin daha iyi anlaşılması için yönlendirilmiş mutagenez gibi daha genişletilmiş çalışmalara ihtiyaç duyulmaktadır. ANAHTAR KELİMELER: Probiyotik, Lactobacillus gasseri, Safra tuzu hidrolaz (STH), Katalitik aktivite ve Sübstrat özgüllüğü