Investigating the role of the mediator complex in estrogen receptor alpha-mediated transcription

Mediator Kompleksi ökaryotik transkripsiyonunun en önemli düzenleyici proteindir. Enhancer sekanslarında bulunan transkripsiyonel aktivatörlerden aldığı sinyalleri promoter bölgelerindeki transkripsiyon sistemine iletir. Mediatorın kendisi ve MED1 alt biriminin östrojen reseptörü alfanın (ERα) aracılık ettiği gen ekspresyonlarının aktifleştirilmesinde ve meme kanseri hücrelerinin proliferasyonunda ilgisi olduğu bilinmesine rağmen Mediator'ın ligand bağlı reseptöre bağlanıp onu spesifik enhancer bölgelerinden promoter bölgelerine hangi mekanizmayla getirdiği ve etkileşimlerini nasıl gen aktivasyonuna çevirdiği hala bilinmemektedir. Biz bu mekanizmayı açıklığa kavuşturmak için Mediator ve ERα arasındaki bağlantıyı belirlemeyi amaçladık. Diğer alt birimlerle birlikte rekombinant aktif çekirdek Mediator kompleksini ürettik. İlginç bir şekilde gördük ki MEDX ile bağlanma potansiyeli göstermektedir. Mediator ERα etkileşiminin yanı sıra Mediator kompleksinin kazanılmış tamoksifen direncindeki rolünü araştırdık. Normal ve tamoksifene dirençli hale gelmiş MCF-7 hücre hatlarında 2XERE TATA promoterına gelen RNA Pol II ve Mediator alt birimlerindeki değişimleri karakterize etmek için immobilized template recruitment assay uyguladık. Başlama Öncesi Kompleksi (PIC) denen transkripsiyon sistemindeki farklılıkların ERα-pozitif meme kanseri hastalarının tamoksifene dirençli hale gelmesindeki etkisini netleştirmeye çalıştık. Dirençli hücrelerde MEDZ alt biriminin promotera gelmesindeki artış ileriki deneyler için dikkat çekici ve umut vericiydi. Bulgularımızın ERα-aracılı transkripsiyonun detaylı olarak aydınlatılmasında ve alternatif tedavilerin bulunmasında yardımcı olmasını umut ediyoruz.