Identification of genes induced by BRCA1 in breast cancer cells

ÖZET MEME KANSERİ HÜCRELERİNDE BRCA1 TARAFINDAN İNDÜKLENEN GENLERİN TANIMLANMASI ARZU ATALAY Doktora Tezi, Molekül er Biyoloji ve Genetik Bölümü Tez Yöneticisi: Yar. Doç. Dr. Işık G.Yuluğ Aralık 2002, 235 sayfa BRCA1 geninin kalıtsal mutasyonları meme, rahim ve diğer organlarda kansere yatkınlığa yol açar. BRCA1 -eksik hücrelerde yeni kromozomal düzenlenmeler görüldüğünden BRCA1 protein ürününün kromozomal bütünlüğün devam ettirilmesinde görevli olduğu düşünülmektedir. BRCA1 -eksik hücrelerdeki kromozomal dengesizlik DNA çift-ipliğinin yanlış tamiriyle ilişkilidir. BRCA1 geninin kromozomal bütünlüğün sağlanmasındaki rolü protein ürününün transkripsiyonel düzenleme dahil bir kaç biyolojik özelliğine bağlıdır. Bu çalışmanın amacı BRCA1 tarafından düzenlenen genlerin tanımlanmasıdır. BRCAl'i meme kanseri hücrelerinde sıkı-düzenlenen "ecdysone" ile indüklenebilen bir sistemle fazla ifade etmek için yapılan ilk çalışmalar, istenen düzeyde BRCA1 proteini vermemiştir ve bu nedenle ektopik BRCA1 ifadesi konstitütif ekspresyon vektörü kullanılarak yapılmıştır. Bu çalışmada MCF7 meme kanseri hücrelerinde BRCAl'in fazla ifade edilmesi sonucu ifade düzeyleri artan genler "Suppression Subtractive Hybridisation" (SSH) metodu kullanılarak tanımlanmıştır. Ayrımsal tarama, dizileme ve homoloji araştırma çalışmaları meme kanseri hücrelerinde BRCAl'in fazla ifade edilmesinin DNA tamiri, kromozom yapımı ve ayrılması, sinyal iletimi, RNA tarama, ubikitin aracılıklı proteoliz, amino asit taşınımı, RNA metabolizması ve glukoz metabolizması gibi hücresel olaylarda yer alan proteinleri kodlayan farklı gen gruplarının ifadelerinde artışa yol açtığını göstermiştir. Bu çalışma meme karsinom hücrelerinde SSH tekniği kullanılarak BRCA1 tarafından indüklenen genleri gösteren ilk çalışmadır. Bu çalışmada tanımlanan genler BRCAl'in tümör baskılayıcı görevlerine yeni bir bakış açısı sağlayabilir. IV