Comparison of enzymatic and non-enzymatic isolation methods for menstrual blood mesenchymal stem cells in maintenance of stemness

Endometrium, rahmin iç kısmında yer alan ve embriyo için zemin sağlayan ince bir epitel tabakadır. Endometrium tabakası her ay gebelik için embriyoya uygun hale gelir, gebelik olmadığı durumlarda adet ile dökülür ve endometriyal tabakayı tekrar gebeliğe hazırlar. Endometriyal tabakada endometriyal mezenkimal kök hücrelerin (eMKH) varlığı, menstrüel kanda (MK-MKH) kök hücre olasılığını beraberinde getirmiştir. MK-MKH'leri tanımlayan çalışmalar, bu hücrelerin mezenkimal kök hücre özellikleri gösterdiğini ve dolayısıyla izolasyon kolaylığı nedeniyle klinik çalışmalarda kullanılma potansiyeline sahip olduğunu belirtmiştir. Literatürde MK-MKH'lerin izolasyonunda farklı yöntemler kullanılmış olmasına rağmen, bu izolasyon yöntemlerinin hiçbiri kök hücre özelliklerini koruma açısından bugüne kadar karşılaştırılmamıştır. Bu bağlamda, bu tezin amacı, enzimatik olmayan, kolajenaz tip 1 ve ikili sindirim yöntemi olmak üzere üç farklı izolasyon yöntemini karşılaştırmak ve menstrüel kandan izole edilen MKHlerin geç pasajlara kadar kök hücre özelliklerini koruma potansiyelini araştırmaktır. İzolasyon yöntemleri karşılaştırıldığında hücre morfolojisinde herhangi bir farklılık gözlenmemiştir. Benzer şekilde, akış sitometrisi ile yüzey belirteçlerinin analizi, kök hücre özelliklerinin erken ve geç pasaj MK-MKH'lerinde korunduğunu ve izolasyon yöntemleri arasında bir fark olmadığını gösterilmiştir. MK-MKH'lerin koloni oluşturma özelliği açısından, üç izolasyon yöntemi arasında erken pasajda en iyi izolasyon yönteminin ikili sindirim izolasyon yöntemi olduğu belirlenmiştir. WST-1 testi kullanılarak hücre büyüme hızı analiz edildiğinde erken pasaj hücrelerinde en iyi izolasyon yönteminin enzimatik olmayan yöntem olduğu görülmüştür. Bununla birlikte, geç pasaj için kaydedilen çoğalma oranındaki azalma, elde edildikleri izolasyon yönteminden bağımsız olarak tüm MK-MKH'lerde belirgin olarak tespit edilmiştir. Sonuç olarak, literatürde ilk kez, MK-MKH'lerin izolasyon yöntemleri kök hücre özellikleri açısından karşılaştırılmış ve sonuçlarımız enzimatik olmayan yaklaşımın en iyi izolasyon yöntemi olarak önermiştir.