Nevşehir Kozaklı kaplıcalarından izole edilen termofilik bakterilerin izolasyonu, identifikasyonu, Bacillus licheniformis SO7'den α-amilaz enziminin saflaştırılması ve karakterizasyonu

Bu tez çalışması kapsamında; Nevşehir-Kozaklı Kaplıcasından alınan su örneklerinden termofilik bakterilerin izolasyonu ve moleküler karakterizasyonu gerçekleştirildi. Yapılan bu çalışma sonucunda izolatların %99 oranında Bacillus licheniformis ve B. paralicheniformis'e benzerlik gösterdiği tespit edildi. Bu izolatlardan petri denemeleri sonucunda en yüksek amilaz aktivitesi veren B. licheniformis SO7 suşu seçilerek, bu izolattan ekstraselüler α-amilaz enzimi nişasta afinite metoduyla tek basamakta saflaştırıldı ve biyokimyasal yolla karakterize edildi. %28,65 verimle 1,95 kat saflaştırılan enzimin molekül ağırlığı SDS-PAGE jel elektroforez yöntemiyle yaklaşık 83,17 kDa olarak hesaplandı. α-amilaz enzimi için optimum pH 7,0 ve optimum sıcaklık 90°C olarak belirlendi. Amilaz enziminin geniş alkali pH aralığında (pH 7,0-11,0) stabil kaldığı görüldü. Enzimin 80°C gibi yüksek bir sıcaklıkta 120 dk sonunda aktivitesinin yaklaşık olarak %80'ini koruduğu tespit edildi. B. licheniformis SO7 α-amilaz enziminin Tween-20 ve Triton X-100 gibi bazı yüzey aktif maddeleri varlığında amilolitik aktivitesinin arttığı belirlendi. Organik çözücülere karşı yüksek bir stabilite gösteren enzimin %30 aseton varlığında aktivitesinin %73'ünü koruduğu görüldü. K+ iyonunun enzimin aktivitesini arttırdığı, EDTA varlığında ise enzim stabilitesinin %86 oranında korunduğu belirlendi. Ayrıca CaCI2 bileşiğinin α-amilaz enzim aktivitesini arttırdığı tespit edildi. α-amilaz enzimi için en yüksek substrat spesifitesi pirinç nişastası olarak saptandı. B.licheniformis SO7 α-amilaz enzimi için KM ve Vmax değerleri sırasıyla 3,24 mg/mL ve 204,08 mmol.mL-1.dk-1olarak bulundu.