Neurogenic transcription factor control of store-operated calcium entry in cortical neurons

Bazik heliks-lup-heliks yazılım faktörü familyasından olan Neurogenic differentiation factor 2 (NEUROD2) yazılım faktörü, beyin gelişiminde önemli bir role sahiptir. NEUROD2, kalsiyum bağlanmasıyla, yazılım faktörü rolünü gerçekleştirir ve nöron oluşumuna öncülük eder. Laboratuvarımızdaki çalışmalar NEUROD2'nin genomda hangi genleri hedef aldığını saptamıştır. Bu hedef genler arasında yer alan Stim1 en yüksek skorlardan birine sahiptir. Tezim üç ana kısımdan oluşmaktadır. İlk kısımda, NEUROD2'nin kalsiyum sinyalinde rol aldığı bilinen hedef genleri üzerindeki etkisini inceledim. NEUROD2'nin Ca2+ / Calmodulin dependent protein kinase (CaMK) metabolic yolunda bulunan birkaç geni hedef aldığını buldum. Ayrıca Neurod2 seviyesini baskılamanın bu genlerin anlatımı üzerinde bir etkisi olup olmadığını inceledim. İkinci kısımda, özellikle NEUROD2'nin Stim1adlı hedef genine odaklandım. NEUROD2'nin Stim1 geninin intronunda bulunan korunmuş bir sekansa bağlandığını bulduk. Ayrıca NEUROD2 seviyesini baskılamanın STIM1'de protein ve mRNA seviyesinde artışa yol açtığını gözlemledik. STIM1 ER'daki kalsiyum iyonu seviyesini algılayan bir protein olduğundan, ben NEUROD2'nin store-operated calcium entry (SOCE) üzerindeki görevini inceledim. Neurod2 seviyesini baskılamanın nöronlarda SOCE'yi arttırdığını ve bu artışın shRNA dirençli bir Neurod2 ile kurtarıldığını gözlemledim. Son kısımda, NEUROD2 üzerinde olası bir control mekanizmasını çalıştım NEUROD2'nin sitoplazma ve çekirdekte bulunduğunu gözlemledim. Ayrıca, sitoplazmadaki NEUROD2'nin moleküler ağırlığı normalden daha fazla olan bir formu olduğunu gözlemledim. Bu ağır form büyük bir olasılıkla bir çevirim sonrası değişim (ÇSD) olayını göstermektedir. Bu ÇSD'nin SUMO olup olmadığını test ettim, fakat sonuçlarım bir kanıya varmak için yetersizdi. Özet olarak, sonuçlarım NEUROD2'nin genel bir nöronal kalsiyum sinyali regülatörü olduğunu göstermektedir. Gelecek deneyler NEUROD2'nin SOCE'yi nasıl etkilediğini bulmaya yoğunlaşacaktır.