Immunotherapeutic applications of nucleic acid based tlr agonists and antagonists

Yapılan son çalışmalar genetik materyalin yaşamın sadece mavi baskısı olmadığını göstermektedir. Genetik materyal, elde edildiği kaynağa ve barındırdığı DNA örgesine göre immün-stimülan ya da immün baskılayıcı özellik göstermektedir. Bakteri genomu kökenli metillenmemiş CpG örgeleri, TLR9 eksprese eden hücreler tarafından yabancı madde olarak algılanıp Th1 tipte bağışıklık yanıtına neden olmaktadır. Memeli genomu kökenli G-zengini sekanslar, telomerik TTAGGG örgesi gibi, ise aksine Th1 tip immün yanıtı baskılamakta ve immün homeostazın sağlanmasını desteklemektedir. Çeşitli TLR ulağı agonist/antagonistleri preklinik/klinik test fazlarında kanserin, bulaşıcı hastalıkların, alerjik hastalıkların ve otoimmün ya da otoenflammatuvar hastalıkların tedavisi için aday ajanlar olarak denenmektedir. Bu tezde, nükleik asit bazlı TLR terapisinin kullanım alanları ŞAP hastalığına karşın aşı formülasyonlarında adjuvant olarak kullanımları ve otoimmün üveit hastalığının kontrolünde immün baskılayıcı ajan olarak kullanımları test edilerek genişletilmeye çalışılmıştır. Yaptığımız çalışmalarda A151 isimli immün baskılayıcı özellikteki nükleik asidin endotoksin kaynaklı üveiti histolojik olarak %60 gerilettiğini, aynı zamanda üveitli hayvanlardaki MIP3α, IL6 ve IFNγ gibi pro-enflammatuvar sitokinleri de %80 oranında baskıladığını gösterdik. Bu immün baskılayıcı ajanın biyolojik etkilerini geniş spektrumlu immün baskılayıcı ilaç olan Restasis™ (emülsiyon formda siklosporin A) ile karşılaştırdık. Yaptığımız bu çalışmada A151'e göre Restasis™ hem hastalık şiddetini gidermede hem de in vivo sitokin ve kemokin düzeylerini dengelemekte daha düşük etkinlik göstermiştir. Tezin ikinci bölümünde ise metillenmemiş CpG DNA örgülerinin (CpG ODN) immün stimülan ajan olarak kullanılması yer almaktadır. Yapılan çalışmada 1555-PS tipi CpG ODN ŞAP aşısı formülasyonlarında adjuvant olarak kullanılmıştır. Bu çalışmada CpG ODN'ler ticari monovalent ŞAP aşısına katılarak ya da serbest Serotip-O antijeni ile formüle edilerek test edilmiştir. CpG ODN katılımının aşı formülasyonlarında kullanılan antijen ihtiyacını 6 kat azalttığı ve virüs nötralizasyon sonuçlarına göre hem daha güçlü hem de daha uzun süreli koruma sağladığı fare çalışmalarında görülmüştür. ŞAP aşı formülasyonlarına CpG ODN katılımı güçlendirici (ikincil) enjeksiyondan 24 saat sonra hücresel bağışık yanıtı 1,5-2 kat arttırmıştır. Sonuçlarımız, bu özgün yaklaşımın virüs enfeksiyonunun çok daha efektif bir şekilde kontrol altına alınabileceğini göstermektedir. Bu tezin son bölümünde CpG ODN'lerin yeni doğan besi piliçlerinde profilaktik ajan olarak kullanımları in vivo etkileri test edilmiştir. Sonuçlarımız CpG ODN kullanımının sadece mortalite oranlarını düşürmekle kalmadığını (> 2.0 %) aynı zamanda endüstriyel açıdan önemli bu hayvanların büyüme performanslarını da olumlu yönde etkilediğini göstermiştir. Bu tezde sunulan çalışmalar, nükleik asit bazlı TLR ulağı agonist/antagonistlerinin gerek klinik açıdan önemli hastalıkların kontrolünde gerekse endüstriyel açıdan önemli hayvanların korunmasında terapötik amaçlı ajan olarak geliştirilmesi için yüksek potansiyele sahip olduğunu göstermektedir. Anahtar kelimeler: Doğal bağışıklık, polisakkarit, nanokompleks, ilaç salım sistemi, TLR, CpG ODN, kanser immünöterapi, aşı, adjuvan.