Analysis of PI(3,5)P2 throughout mitosis

Fosfatidilinositol 3,5-bifosfat (PI(3,5)P2), membran füzyonu/fisyonu, Ca+2 sinyali, koful asitliği, seçici ve genel otofaji, stres tepkisi, MVB yolu, RNA granül taşınması gibi çeşitli sinyalleme ve düzenleyici yolaklarda yer alan az miktarda bulunan bir fosfatidilinositol türevidir. Tomurcuklanan mayada gerçekleştirmiş önceki genetik araştırmalar VAC7, VAC14 ve FAB1 gibi PI(3,5)P2 regülatörlerini mitozdan çıkışta görevli genlerin iyi çalışmadığı durumda hücre bölünmesi için gerekli genler arasında bulundu. Bu tezde mitoz ve PI(3,5)P2 arasındaki etkileşimi araştırmayı amaçladık. Önce PI(3,5)P2 sentezinin hücre döngüsü tarafından düzenlenip düzenlenmediği soğulandı. Bu amaçla, florasan hücre mikroskobu kullanılarak hücre döngüsü boyunca bilinen bir PI(3,5)P2 efektörü olan Atg18'in lokalizasyonu ve seviyeleri analiz edildi. Atg18-GFP'nin, PI(3,5)P2 ve Vac7'ye bağlı olarak koful zarına lokalize olduğu görüldü. Atg18-GFP'nin ağırlıklı olarak mitoz sırasında ana hücrenin kofulundan ziyade yeni oluşan hücre kofulunun çevresinde lokalize olduğunu görüldü. Daha sonra, mitoz sırasında PI(3,5)P2 'nin hangi proteinlerle etkileşime girdiği araştırıldı. Bunun için mitotik hücre pelletleri ve PI(3,5)P2 kaplı boncuklar kullanarak presipitasyon yaklaşımı kullandık. Mitotik çıkışı tetikleyen fosfataz Cdc14'ü bağlayan bir nükleolar protein olan Net1, PI(3,5)P2 kaplı boncuklar üzerinde tespit edildi. Ek olarak, presipitasyon deneyinin sonucunda ribozomal ve rRNA ile ilgili proteinler de elde edilmiştir. Birlikte ele alındığında, Atg18'in yavru hücreye özgü lokalizasyonu ve dolayısıyla PI(3,5)P2 tomurcuklanan mayanın asimetrik hücre bölünmesinde yavruya özgü bir rolü olduğunu gösterebilir. Ek olarak, potansiyel PI(3,5)P2 efektörleri mitotik çıkış, rRNA granül taşınması ve translasyonda PI(3,5)P2 'nun görevleri olabilir. İlerleyen çalışmalar asimetrik PI(3,5)P2 sentezinin fonksiyonel önemini ve ayrıca tanımlanan yeni PI(3,5)P2 efektörlerinin özgüllüğünü ve önemini ortaya çıkaracaktır.