Polifenol oksidaz enziminin farklı maddelerle immobilizasyonu ve bazı özelliklerinin incelenmesi

Bu çalışmanın amacı, Polifenol oksidaz (PPO) enzimini Sakarya bölgesinde yetişen roka (Eruca vesicaria) bitkisinden karakterize ederek bu enzimi Ca-aljinat, Ba-aljinat, aljinat-poliakrilamit ve poliakrilamit kullanılarak immobilize edilip bunların özelliklerini inzelemekitr. Bunun için roka bitkisinden izole edilen PPO enziminin optimum pH ve optimum sıcaklık değerleri beş farklı substrat kullanılarak (4-metil katekol , katekol , pyrogallol , gallik asit ,L-tirozin ) belirlenmiştir. PPO enziminin en iyi substratı 4-metil katekol olarak bulunmuştur. Bu substrat için optimum pH 5.0 optimum sıcaklık ise 20 oC olarak belirlenirken Km ve Vmax değerleri sırasıyla 3,68 mM ve 16,6.10-3 EÜ/dak olarak bulunmuştur. Karakterizasyon işleminin ardından immobilizasyon çalışmalarına geçilmiş ve roka PPO enzimi Ca-aljinat, Ba-aljinat, aljinat-poliakrilamit ve poliakrilamit kullanılarak immobilize edilmiştir. İmmobilize enzim serbest enzimle kinetik olarak kıyaslanmıştır. Buna göre Ca-aljinat, Ba-aljinat, aljinat-poliakrilamit ve poliakrilamit ile immobilize edilen enzimin 4-metil katekol substratına karşı Km değerleri sırasıyla 4,33mM , 1,45mM , 2,41mM, 2,93mM, Vmax değerleri ise 3,2. 10-3 EÜ/dak , 4,0 10-3 EÜ/dak , 9,2.10-3 EÜ/dak , 10,0 10-3 EÜ/dak olarak belirlenmiştir. İmmobilize edilen PPO enziminin optimum pH ve sıcaklıkları serbest enzim çalışmaları ile paralellik göstermiştir. Depolama kararlılığı çalışmalarında ise enzimin aktifliğinin dayanıklılığı serbest çalışmalara göre oldukça artış göstermiştir. İmmobilize edilen PPO enziminin tekrar kullanılabilirliği ölçülmüş ve 12 kullanım sonunda enzimin aktifliğini % 26 oranında koruduğu görülmüştür.Anahtar Kelimeleri : Polifenol oksidaz, roka, eruca vesicaria, enzim immobilizasyonu, aljinat, poliakrilamit