Polifenol oksidaz enziminin posof badele elmasından (Malus domestica L.) saflaştırılması, karakterizasyonu ve bazı kimyasalların ve metal iyonlarının enzim aktivitesi üzerine etkilerinin incelenmesi

Posof Badele elmasından (Malus domestica L.) yapılan bu çalışmada polifenol oksidaz (PPO) enzimi aseton çöktürmesi yöntemiyle kısmi olarak saflaştırıldıktan sonra afinite kromatografisiyle saflaştırılıp karakterize edilmiş ve enzimin kinetik özellikleri incelenmiştir. Saf enzim örnekleri SDS-PAGE yapıldığında PPO enzimi tek bir bant şeklinde gözlenmiş, enzimin saflaştırıldığı ispat edilmiştir. L-Tirozin, 4-metilkatekol (4-MK) ve katekol substratlarından faydalanılarak PPO'nun spesifik substratı tespit edilmiştir. PPO'nun 4-MK substratıyla optimum pH'sının 5,5 olduğu saptanmıştır. KM ile Vmax değerleri katekol substratıyla 33,3 mM ve 5,86 EU/mLdk, 4-MK substratıyla ise 8,53 mM ve 3,54 EU/mLdk olarak tespit edilmiştir. Optimum sıcaklık, pH kararlılığı, termal stabilitesi ve inhibisyon çalışmaları için PPO'nun aktivitesi 4-MK substratıyla ölçülmüştür. Enzimin stabil pH'sının 6,0, optimum sıcaklığının ise 10°C olduğu saptanmıştır. PPO'nun termal ısı kararlılığı incelendiğindeyse, 15 dakika arayla toplam 1 saat yapılan inkübasyonların ardından, 0-10-20-30°C sıcaklıklarında kararlı olduğu tespit edilmiştir. Ayrıca saflaştırılan enzim üzerine bazı metal iyonlarının (Mg2+, Al3+, K+, Cu2+ ve Na+) ve kimyasalların etkileri incelenmiştir. Al3+ ve Cu2+metal iyonlarının enzimi aktive ettikleri tespit edilmiştir. Ki ile I50 değerleri hesaplanmış ve inhibisyon türleri tespit edilmiştir. Posof Badele elması (Malus domestica L.) PPO'su üzerine en kuvvetli inhibisyon etkisinin askorbik asit tarafından yapıldığı bulunmuştur.