Pseudomonas aeruginosa fajlarının izolasyonu ve tanımlanması

Pseudomonas aeruginosa, yüksek antibakteriyel direnci, ortam koşullarına hızlı uyum sağlayabilmesi ve biyofilm üretimi ile ön plana çıkan fırsatçı bir patojendir. Bakteriyofajlar, bakteri hücrelerini enfekte ederek onların inhibe olmasını sağlayan virüslerdir. Bu çalışmada P. aeruginosa'ya etkili fajların izolasyonu ve karakterizasyonu amaçlanmıştır. Çalışma kapsamında 8 farklı P. aeruginosa suşu ve 15 fajın izolasyonu ve saflaştırılması sağlanmıştır. Fajların latent dönemleri 5-30 dk. arasında; patlama büyüklükleri ise 10 ile 200 POB/hücre arasında bulunmuştur. Bu fajların adsorpsiyon hızları ise 4,6×10-7 ile 1,62×10-8 mL/dk arasında bulunmuştur. Adsorpsiyon oranları ise en düşük %87 ve en yüksek %100 olarak bulunmuştur. Fajların konakçı skalası ve EOP değerleri belirlenmiştir. Fajlar çalışmada kullanılan farklı cinsteki bakterileri enfekte etmezken farklı bir tür olan P. brassicacearum'a da litik etki göstermiştir. Yine tez kapsamında fajların farklı sıcaklık, pH ve NaCl içeren ortamlarda yüksek stabilite gösterdiği tespit edilmiştir. Ayrıca fajların farklı oranlarda antibiyofilm etkinliği tespit edilmiştir. Fajların DNA'ları izole edilmiş ve SmaI, NdeI, EcoRI, EcoRV, XhoI restriksiyon enzimleri ile kesilmiştir. RFLP analizinin sonucuna göre 8 farklı faj seçilmiştir. Bu fajların TEM mikrograflarına göre podovirüs olduğu, kafa çaplarının 42,6 nm ile 69,6 nm; kuyruk uzunluklarının ise 10 nm ile 41,6 nm arasında olduğu bulunmuştur. Bu fajlardan oluşturulan karışım ile su, yağsız süt ve marul örneklerinde P. aeruginosa'ya karşı denemeler yapılmıştır. Faj karışımı MOI 100 değerinde su ve yağsız sütteki bakterileri tamamen inhibe etmiştir. Marul örneğinde ise inhibisyon elde edilememiştir. Çalışmada P. aeruginosa suşları 48 saat boyunca faj karışımına tabi tutulmuş ve süre sonunda suşların streptomisine, siproflaksasine, tetrasikline ve penisiline karşı farklı düzeylerde duyarlılık kazandığı tespit edilmiştir. ANAHTAR KELİMELER: Pseudomonas aeruginosa, Bakteriyofaj, Faj terapi, Antibiyofilm