Ispanaktan aquaporin saflaştırılması ve etkinliğinin incelenmesi

Tez çalışmasında, birçok bitkide ve ayrıca doğadaki diğer birçok organizmada su moleküllerinin biyolojik membranlar boyunca hızlı ve aktif geçişinde rol oynayan aquaporin su kanalı proteinlerinin saflaştırılması ve etkinliğinin belirlenmesi amaçlanmıştır. Çalışmada aquaporin saflaştırılması için, afinite temelli bir ayırım kolonu dizayn edilerek, aquaporinin tek basamakta saflaştırılması sağlanmıştır. Bu amaçla, öncelikli olarak nano anti-aquaporin antibadi partikülleri ANADOLUCA (AmiNoAcid (monomer) Decorated and Light Underpining Conjugation Approach) metoduna göre sentezlenmiş ve karakterize edilmiştir. Nano anti-aquaporin antibadi partikül sentezinde, anti-aquaporin antibadi, fotosensitif rutenyum tabanlı amino asit monomeri bis(2-2ʹ-bipiridil)(MATyr)2-rutenyum (II), MATyr-Ru-MATyr, ile ANADOLUCA metoduna göre dekore edilmiş ve mikroemülsiyon polimerizasyonuyla nanopartikül olarak sentezlenmiştir. Ardından, aquaporin için spesifik bir kromatografik ayırım kolonu elde etmek amacıyla, sentezlenen nano anti-aquaporin antibadi partikülleri 2-hidroksietil metakrilat (HEMA) kriyojeline tutturulmuştuır. Ispanak ekstraktından aquaporin proteini, sentezlenen kriyojel kolonun Hızlı Protein Sıvı Kromatografisinde (FPLC) kolon dolgu maddesi olarak kullanılmasıyla tek basamakta saflaştırılmıştır. Saflaştırılan aquaporinin molekül ağırlığı, proteinin saflığı ve ayırım sırasındaki yapısal değişimleri karakterize edilmiştir. Böylece tez kapsamında yapılan çalışma ile spesifik etkileşim içeren, tekrar tekrar kullanılabilir yeni kolon dolgu maddesi dizaynı ile aquaporin tek basamakta yüksek saflıkta saflaştırılmıştır. Anahtar Kelimeler: Aquaporin, ANADOLUCA, Kriyojel kolon, FPLC.