Rekombinant immunoglobulin G1 monoklonal antikorununKluyveromyces lactis maya ekspresyon sistemi kullanılarak üretimi

Hedeflerine yüksek afinite ile bağlanan monoklonal antikorlar, pek çok hastalığın tedavisinde önemli rol oynamaktadır. Son yıllarda, rekombinant DNA teknolojisindeki gelişmeler, hayvan aşılamasına gerek kalmadan monoklonal antikor üretimini mümkün hale getirmiştir. Memeli hücreleri gibi yaygın kullanılan platformların yanı sıra K.lactis gibi maya türleri de rekombinant protein üretimi için ön plana çıkmaktadır. Bu tez çalışmasında, K.lactis maya ekspresyon sistemi kullanılarak yaklaşık 150 kDa büyüklüğünde tam boyutlu trastuzumab üretilmiş ve hücre dışına salgılanması sağlanmıştır. Hafif ve ağır zincir dizileri başarılı bir şekilde pKLAC2 vektörüne klonlanmış ve K.lactis hücrelerine elektroporasyon yoluyla aktarılmıştır. Laktoz içeren BMLY besiyerinde indüklenen kültürde, hafif ve ağır zincir transkriptlerinin başarıyla üretildiği doğrulanmıştır. Trastuzumabın saflaştırılması için amonyum sülfat presipitasyonu ve hidrofobik etkileşim kromatografisi yöntemleri kullanılmıştır. SDS-PAGE ve western blot analizleri ile tam boyutlu trastuzumabın başarıyla üretilip hücre dışına salgılandığı doğrulanmıştır. Ayrıca, MCF7 hücre lizatı kullanılarak, saflaştırılmış trastuzumabın HER2 reseptörüne bağlanabildiği gösterilmiştir.