Polr2a/rpb1 subunit of rna polymerase II interacts with ntd-med14 containing core mediator complex to facilitate basal and activator driven transcription

Metazoana özgü Meditör, çoğu alt birimi mayadan insana evrimsel süreçte korunmuş olan ve toplamda 30 alt birimden oluşan 2-MDa moleküler ağırlığında bir protein kompleksidir. Hücrenin kendini idame ettirmesi ve düzenlenmesi, içsel ve dışsal sinyaller sonucunda gerçekleşen RNA polimeraz II (Pol II) aracılı transkripsiyonun zamansal ve uzamsal kontrolüne bağlıdır. Çevresel koşulların ve diğer genetik ifadelerin neden olduğu bozulmalar hücrelerin kaderini değiştirebilir ve kanser gibi birçok hastalığa yol açabilir. Mediatör; hücre büyümesini ve farklılaşmasını, homeostazı ve gelişimi düzenlenmek için RNA polimeraz II'ye sinyal gönderiminden sorumlu olması nedeniyle hücresel ortamın korunmasında kritik bir rol oynar. Bu nedenle, Mediatör'ün Pol II genlerinin ekspresyonunu hangi mekanizmalarla düzenlediğinin anlaşılması önemlidir. Kor Mediatör kompleksi ve RNA Polimeraz II arasındaki etkileşim yüzeyinin aydınlatılması için, Multibac ekspresyon sistemini kullanarak Mediatör ve Pol II alt birimlerini içeren rekombinant protein alt komplekslerini sentezledik. Sonuçlarımız, Pol II'ye ait POLR2A (RPB1) alt biriminin 84 kDa büyüklüğündeki Med14'ü içeren Kor Mediatör kompleksi ile etkileşime girdiğini ve bu etkileşimin Med14 alt biriminin N terminal bölgesi (NTD-Med14) aracılığıyla gerçekleştiğini göstermektedir. Ayrıca, Pol II'ye ait POLR2C (RPB3), POLR2D (RPB4), POLR2E (RPB5), POLR2F (RPB6), POLR2G (RPB7), POLR2H (RPB8), POLR2I (RPB9) POLR2L (RPB10), POLR2J (RPB11) ve POLR2K (RPB12) gibi diğer alt birimlerin Kor Mediatör kompleksi ile etkileşmediği gösterilmiştir. Yaptığımız bağlanma analizi, rekombinant RPB1 alt biriminin, Kor Meditör ile etkileşime girebilmek için endojen Pol II ile rekabet ettiğini ve böylece stabil bir RPB1-Kor Mediatör protein kompleksi oluşturduğunu da göstermiştir. RPB1 alt birimi ile NTD-Med14'ü içeren Kor Mediatör kompleksi arasındaki etkileşim Med26'dan bağımsız olarak gerçekleşmektedir. Bizim modelimiz Pol II'nin Kor Mediatör kompleksi aracılığıyla promotor bölgesine getirildiğini önermektedir. Bu modele göre NTD-Med14 içeren Kor Mediatör kompleksi, RNA polimeraz II'nin RPB1 alt birimi ile etkileşime girmekte ve bazal ve aktivatöre bağımlı transkripsiyonu kolaylaştırmak için promotor bölgesine toplanmasını sağlamaktadır. Anahtar Kelimeler: Mediatör kompleks, Multibac ekspresyon sistemi, RNA polimeraz II, RPB1, NTD-Med14, transkripsiyon.