Analysis of members of the SLIT-ROBO pathway as diagnostic and prognostic tools in hepatocellular carcinoma with special focus on ROBO2-associated cellular phenotype

Hepatoselüler karsinom, yıllık yarım milyonu aşan yeni vaka sayısıyla, dünya çapında en sık rastlanan altıncı kanser türüdür. Hepatoselüler karsinom, siroz hastalarının temel ölüm sebeplerinden hepatit B ve C enfeksiyonuyla ilişkilendirilmiştir. Aflatoxin B'ye maruz kalma, kronik alkol kullanımı ve sirozu tetikleyen bütün etkenler diğer etiyolojilerdir. Hepatoselüler karsinomun erken tanısı için risk gruplarının takibi önemlidir ve bu kansere karşı spesifisitesi ve duyarlılığı daha yüksek yeni belirteçlerin geliştirilmesi gerekmektedir. Bunun yanında hepatoselüler karsinom alt tipleri için biyobelirteçlerin tanımlanması yeni terapi metodolojilerini de mümkün kılabilir. Bu çalışmada, SLIT-ROBO gen aileleri üyelerinin hepatoselüler karsinom tanı ve takibinde yeni belirteçler olarak kullanılabilirliğini inceledik.Gerçek zamanlı kuantitatif RT-PCR yöntemiyle SLIT-ROBO yolağı genlerinin hepatoselüler karsinomda ifadesini belirleyen bir imza tanımladık. ROBO1 gen ifadesinin hepatoselüler karsinom derecesine ve diferensiyasyonuna bağlı olarak değiştiğini gösterdik. Bununla beraber ROBO4 ifadesindeki azalma ve SLIT2 ifadesindeki artış, ileri derece ve kötü diferensiye hepatoselüler karsinom dokularını belirledi. Sonuçlarımız, ROBO1 ve ROBO4 ifadelerinin hepatoselüler karsinomun erken tanısında kullanılabileceğine işaret etti. Diğer bir odak olarak; AFP ifadesi bulunan iyi diferensiye bir model olan Huh7 hücrelerinde, ROBO2 gen ifadesini kalıcı bir şekilde baskıladık ve bu etkiyle ilişkili hücre fenotipini tanımladık. Bu şekilde elde edilen kalıcı tek-tip hücrelerde, ROBO2 geninin baskılanması hücrelerin bölünme hızını etkilerken yara-iyileşmesi (wound-healing) deneylerinde ölçülen göç hızına istatikselolarak anlamlı etkisi görülmedi. Bağlantılı bir mikrodizi çalışmasında ROBO2 ifadesi baskılanmış bu hücrelerle, ROBO2'yi ifade eden kontrol hücreler arasında farklı ifadelere sahip genleri inceledik. Bu incelemede CK19, CD44, ABCG2/BCRP2 hepatik öncül hücre belirteçleri ve ayrıca insanda HCC kanser kök hücre belirteci olarak öne sürülen CD133 ifadelerinin, ROBO2 ifadesi baskılanmış hücrelerde arttığını bulduk. Bunlara ek olarak KLF4 ifadesi ROBO2 ifadesi baskılanmış bu hücrelerde arttı. SLIT-ROBO yolağı ve CD133 arasında transkripsiyon seviyesinde genetik bir etkileşim bulunduğunu öne sürüyoruz.