Schizosaccharomyces pombe'de heksoz taşıyıcılarının düzenlenmesine katılan transkripsiyon faktörlerinin araştırılması

Bu tez çalışması kapsamında farklı karbon kaynaklarında üretilen Schizosaccharomyces pombe ırklarında, SPCC320.03 geninin (Saccharomyces cerevisiae'de Rgt1 transkipsiyon faktörünü şifreleyen RGT1 geninin ortoloğudur) heksoz taşıyıcılarını şifrelen ght 1-6 genlerinin transkripsiyonları üzerindeki etkisi incelendi. Farklı kaynaklarının karbon katabolit mekanizmasında transkripsiyon faktörü olarak görev alan scr1 geni ve glukoneogenesis yolağında görev alan fbp1 geninin transkripsiyonları üzerine olan etkisi deneyin etkinliğinin kontrolü olarak gerçekleştirildi. Bu amaçla SPCC320.03 geninin pSLF272 vektörü ile ligasyonu gerçekleştirildi ve iki S. pombe ırkına, EDD666 ve SPCC320.03Δ, transformasyonu yapıldı. Transformasyonun başarısı PCR ve western blot analizleri ile kanıtlandıktan sonra, %2 glukoz, %2 glukonat ve %2 gliserol + %0,1 glukoz içeren besiyerlerinde üretilen S. pombe ırklarında ilgili genlerin RNA ekspresyon seviyeleri Real-Time PCR yöntemi ile incelendi. EDD666 ırkına oranla SPCC320.03Δ ırkında; %2 glukonat ile %2 gliserol + %0,1 glukoz ortamında ght3, ght4 ve ght6 genlerinin gen anlatım düzeylerinin arttığı; %2 gliserol + %0,1 glukoz ortamında ise ght2 geninin ise anlatımının azaldığı gözlemlendi. Elde edilen sonuçlar ile SPCC320.03 geninin glukoz açlığı durumda ght3, ght4 ve ght6 glukoz taşıyıcı genlerinin anlatımını negatif yönde düzenleyebilen; ght2 glukoz taşıyıcı geninin anlatımını ise pozitif yönde düzenleyebilen bir transkripsiyon faktörü olabileceği açısından güçlü kanıtlar sunulmuştur.