Development of a home-built light sheet fluorescence microscope for cleared tissue imaging

Işık tabakası floresans mikroskopisi, konfokal mikroskop ve yansıma floresans mikroskop yöntemlerine nazaran çeşitli yararları nedeniyle biyomedikal alanı gibi yaşam bilimlerinde sıkça uygulanan bir görğntüleme yöntemi haline gelmiştir. LSFM yöntemi aydınlatma için odaklanmış bir nokta yerine dar bir ışık çizgisi kullanıldığından tahribatsız bir tekniktir bu da geniş görüş alanlı hızlı görüntüleme sağlamaktadır ve fotoışıldama bozulması etkisi de azalır. Bu çalışmada ticari olarak erişilebilir donanımlar kullanarak kendi labaratuvarımızda yaptığımız LSFM doku görüntüleme düzeneğinin gelişimini tanıtıyoruz. LSFM için silindirik mercek kullanarak ince bir lazer ışığı tabakası oluşturmak gerekir. Ornek bu ışık tabakası boyunca taranır böylece örnek düzlemleri seçime bağlı olarak aydınlatılır. Ornek düzlemlerinin seçime bağlı olarak aydınlatılması, istenilen odak düzlemlerinde tercihe bağlı floresan uyarılmasına imkan verir. Orneğin üç boyutlu görüntüsü bu seçili düzlemler kullanılarak elde edilir. LSFM düzeneği "Open Access Platform for Selective Plane Illumination Microscopy" isimli açık kaynak platformundan yararlanılarak yapılmıştır. Görüntüleme için kullandığımız örnek, floresan boya ile boyanmış şeffaflaştırılmış dokudur. Örneği dalga boyu 525 nm olan birkaç lazer kaynağı ile aydınlatabilmek için SHG yöntemiyle Coherent Chameleon ayarlanabilir lazer ve diyot lazeri kullanılmıştır. Üç boyutlu görüntülerr ise Fiji ImageJ yazılımı vasıtasıyla daha önce görüntülenen düzlemlerin birleştirilmesiyle oluşturulmuştur.