Stbm/vangl (strabismus/vangogh like) gen ekspresyonunun hepatosellüler kanser hücre dizilerinde hücre davranışı üzerine olan etkileri

ÖzetSTBM/VANGL (Strabismus/VanGogh Like) Gen Ekspresyonunun HepatosellülerKanser Hücre Dizilerinde Hücre Davranışı Üzerine Olan EtkileriG. Ozan ÇETİNDokuz Eylül Üniversitesi, Tıp Fakültesi, Tıbbi Biyoloji ve Genetik AD, İzmirHepatosellüler kanser (HCC) dünyadaki en yaygın beşinci kanser türüdür vebilinen etkin bir tedavisi bulunmamaktadır.Wnt düzlemsel hücre polaritesi yolunda yer alan ve transmembran bir proteinolan Van Gogh like 1 (Vangl1) proteini gelişimsel süreçte embriyonik hücrelerinplanar hücre polaritesi kazanmalarını sağlar ve konverjant ekstansiyon hareketindensorumludur. Erişkinde, spesifik olarak testis ve ovaryumda, bunların dışında beyindeve prostatta eksprese olur.VANGL1 ekspresyonu, aralarında HCC'in de bulunduğu çeşitli insan kanserhücre dizilerinde gösterilmiştir. Araştırmamızda, VANGL1 geni siRNA yöntemiylebaskılanan HCC hücrelerinde, bu baskılanmanın yol açacağı hücre davranışdeğişikliklerinin incelenmesi hedeflendi.HCC hücre dizilerinde, VANGL1 ekspresyonunun varlığı, RT-PCR ve gerçekzamanlı PCR yöntemleriyle gösterildi. İnternet tabanlı bir yazılım kullanılarakVANGL1 genine spesifik siRNA hedef bölgesi belirlendi. Bu hedefe yönelik saç tokasıyapısındaki siRNA'yı transkribe edecek DNA dizisi tasarlandı. pSilencer 4.1 CMVNeo plazmidine siRNA kalıbı eklenip HepG2 hücreleri plazmidle transfekte edildi.VANGL1 geninin baskılandığı koloniler RT-PCR ile saptandı. Bu kolonilerden eldeedilen protein lizatları western blotlama ile değerlendirilerek gen ekspresyonununbaskılandığı doğrulandı. VANGL1 geni baskılanmış hücrelerin motilite ve invazyonözellikleri Boyden odacık deney sistemi ile proliferasyon analizleri ise akımsitometresi ile değerlendirildi.VANGL1 geni sessizleştirilen HCC hücrelerinin motilite özellikleri,baskılanmayan hücrelere göre belirgin değişiklik göstermezken, invazyonyeteneklerinin üç kat azaldığı gözlendi. Proliferasyon analizinde, VANGL1 genisessizleştirilmiş hücrelerle atasal hücre grubu arasında S fazındaki hücre oranıaçısından belirgin farklılık gözlenmemiştir.Sonuçta Vangl1 hücre motilitesinden çok hücre invazyonunu etkilemektedir.Bu etkinin mekanizmasını ortaya çıkartmak üzere ileri araştırmalar yapılmalıdır.Anahtar Kelimeler: Wnt, VANGL1, hepatosellüler kanser, motilite, invazyon,proliferasyon,