Tortum elmasından (Malus sylvestris.) polifenol oksidaz enziminin afinite kromatografisi ile saflaştırılması, karakterizasyonu ve bazı kimyasalların enzim aktivitesi üzerine etkisinin incelenmesi

Polifenol oksidaz enzimi bazı sebze ve meyvelerde enzimatik kararmaya neden olur. Bu çalışmada, PFO enzimi Tortum elmasından (Malus sylvestris.) Sepharose 4B-L-tirozin-p-aminobenzoik asit afinite kolonu ile ilk kez saflaştırıldı. Enzimin saflığının kontrolü sodyum dodesil sülfat poliakrilamid jel elektroforeziyle yapıldı. Katekol ve 4-metil katekol substratları kullanılarak PFO enziminin optimum pH, optimum sıcaklık, optimum iyonik şiddet, stabil pH, KM ve Vmax değerleri belirlendi. Enzimin iki ayrı substratı için sırasıyla optimum pH'sı 5,0-5,5; optimum sıcaklığı 10°C; optimum iyonik şiddeti 0,05 M; stabil pH'sı 5,5, KM değeri 6,17-4,16 mM, Vmax değeri 3,38-7,75 µmol/dk olarak belirlendi. İnhibitör çalışmalarında askorbik asit, sodyum azit, tiyoüre, GSH ve DTT çalışıldı. Bu inhibitörler için beş farklı inhibitör konsantrasyonunda IC50 değerleri belirlendi. Lineweaver-Burk grafikleri yardımıyla bu inhibitörler için Ki sabitleri ve inhibisyon türleri belirlendi. Ki sabitleri ve IC50 değerlerine göre en etkili inhibitörün askorbik asit olduğu tespit edildi.