Applications using a high resolution fluorescence microscope

Eşodaklı mikroskopi tekniği görüntü alma süresini arttırmak pahasına görüntülerinçözünürlüğünü arttırmada kullanılan bir tekniktir. Bu teknik, arka plan gürültüsünü filtrelediğiiçin geniş alanlı mikroskopi tekniğine göre daha yüksek bir çözünürlük sağlar. Buna rağmenveri alma süresinin kısa olması geniş alanlı mikroskopi tekniğini bazı uygulamalarda eşodaklımikroskopi tekniğine göre üstün kılar.Florışıl rezonans enerji geçişi (FRET), optik olarak uyarılmış molekülden (verici), bumolekülün yakının da bulunan uyarılmamış moleküle (alıcı) ışınım olmadan gercekleşenenerji transferidir. FRET verimliliginin ölçülmesi verici ve alıcı moleküllerin yerlerininnanometre mertebesinde bir netlikte (<10 nm) belirlenmesinde kullanılan güçlü bir araçtır.PMMA ince filmi içerisindeki Rhodamine B ve Fluorescein Na floresan molekülleriarasındaki enerji transferini incelemek için toplam iç yansıma ışıma mikroskopi tekniğinikullanıldı. FRET sinyalini bulabilmek için spectraFRET yönteminin adımları takip edilerek,donor molekülünden acceptor molekülüne enerji geçişi olduktan sonra, donor ışımasındakiazalmaya bakılarak FRET verimliliği hesaplandı.Eşodaklı mikroskopi tekniği kullanılarak, proteinlerin hücre içerisinde bulunduklarıyerler belirlendi. Melanopsin proteinleri hücre zarına yerleşirken, Cry proteinlerinin hücresitoplazmasına dağıldıgı gözlemlendi. Deneyler ayrıca kırmızı ışıyan protein (RFP) ileetiketlenmiş melanopsin proteini ve yeşil ışıyan protein (GFP) ile etiketlenmiş cryptochromeproteinleri ile yapıldı. Amacımız bu iki protein arasında etkileşim olup olmadığına buproteinleri etikelemekte kullanılan kırmızı ve yeşil ışıyan proteinler arasındaki enerji geçişiverimliliğine bakarak karar vermek.Son olarak, eşodaklı mikroskopi ve geniş alanlı mikroskopi teknikleri kullanılarakPMMA ince film tabakası içersinde bulunan Rhodamine B molekülünün tek moleküldavranışı gözlemlendi.