In vivo and in vitro analyses of mrna expression of robo2 in zebrafish in the context of pi3k/akt/tor pathway

Robo2 sinir sisteminin önemli bir akson rehberliği reseptörüdür. Slit reseptörüolan bu protein, aksonların büyüme bölgelerinde itici bir görev üstlenir. Bununyanında, normal hücre göçünde de rolü olduğu bilinmektedir. Bu çalışmada,zebrabalığında robo2 geninin yeni bir izoformu (robo2_tv2) bulunmuştur. Bu izoformalternatif olarak normalde kullanılmayan bir korunmuş alternatif egzonu (CAE)içermektedir. Robo2_tv2 farklı şekillerde sinirsel olmayan hücrelerde ifade edilirken,robo2_tv1 ifadesi göz ve beyin gibi sinirsel hücrelerle sınırlıdır. Bulgularımız CAE yedenk düşen amino asit sekansının zebrabalığı ve memeliler arasında önemli ölçüdekorunduğunu göstermiştir. Ayrıca CAE amino asit sekansının robo1 ve robo4'te dekorunduğunu bulduk. Zebrabalığının yanında sıçanda yaptığımız çalışmalar daalternatif CAE kullanımının değişik erişkin hayvan dokularında korunduğunugösterdi. Bu sonuçlar, alternatif robo2 izoformlarının dokulara özel olarak kullanımınıönermektedir.Bunun yanında, robo2 geninin PI3K/AKT/TOR yolağı üyeleriyle olası biryakınlığı deneysel ve bilgisayar destekli çalışmalar sonucu gösterilmiştir. Mathavan etal. (2005) mikroarray çalışmasının biyoinformatik analizi Robo2 nin PI3K/AKT/TORyolağı üyeleriyle ilişkili olduğunu gösterdi. Bu genler arasında Rheb, Gsk3alpha,PP2A ve birçok Wnt sinyal yolağı üyesi yer aldı. Stuart el al. (2003) korunmuşbirlikte ifade ağı analizi Robo2 ve Tor u indirekt komşu olarak gösterdi. Pik3r2, Akt2,Gsk3b genleri sekans ve ifade olarak analiz edildi ve zebrabalığında korunduğugösterildi. Rapamycin verilmesi ve serum değerinin değiştirilmesi sonrasında builginilen genlerin ifadeleri RT-PCR ve real-time RT-PCR metodlarıyla analiz edildive bu genlerin bahsi geçen koşullarda transkript olarak değişik ifadelerdebulunabileceği gösterildi ancak bu deneylerdeki örnek sayısı istatiksel olarak geçerlibir sonuca varmak için yeterli olmamıştır.Gelecek çalışmalarda, alternatif CAE kullanımının fonksiyonel ilişkisiçalışılacaktır. Değişik robo2 izoformlarının değişik kondisyonlardaki davranışı kanserde dahil olmak üzere çalışılacaktır.