Çam fıstığı tohumundan (Pinus pinea L.) lipaz enziminin saflaştırılması ve kinetik özelliklerinin incelenmesi

Lipazlar (triaçilgliserol açilhidrolazlar, E.C.3.1.1.3), canlılarda gliserol ve uzun zincirli yağ asitlerinden oluşan esterlerin sentezini ve hidrolizini katalizlerler. Lipazlar sanayide de, biyolojik proseslerdeki kullanım alanları gün geçtikçe artmaktadır. Bu çalışmada pinaceae familyasında yer alan çam fıstığı (Pinus pinea) türünün tohumlarından lipaz enziminin saflaştırılması ve kinetik özelliklerinin incelenmesi amaçlanmıştır. Çam fıstığı tohumundan lipaz enzimi saflaştırmak için; yağsızlaştırma ve protein tayini yapılmıştır. Daha sonraki aşamalarda ise amonyum sülfat çöktürmesi, diyaliz, jel filtrasyon kromatografisi gibi metodlar kullanılmıştır. Elde edilen enzimlerin saflığını belirlemek için aktivite tayini ve elektroforez (SDS-PAGE) tayini yapılmıştır. Bu çalışmanın sonuçunda çam fıstığı tohumundan saflaştırılan enzimin optimum pH 4,8 ve optimum sıcaklığın 50°C olarak bulunmuştur. Ayrıca stabil pH 4,4 ve stabil sıcaklığı 50°C olarak belirlenmiştir. Çam fıstığı tohumundan elde edilen lipazın depo kararlılığı 4°C'de enzimin spesifik aktivitesinin korunmadığı ve enzimin dayanıksız olduğu gözlenmiştir. Çam fıstığı tohumu lipazının Km ve Vmax değerleri Km=0,0773 Mm ve Vmax 1,5013U/dk.mg olarak bulunmuştur. Anahtar Kelimeler: Çam fıstığı tohumu, Enzim kinetiği, Karakterizasyon, Lipaz, Saflaştırma.