Estrojen pozitif kanser hücrelerinde PI3K/AKT/mTOR bağımlı proliferasyonda sparstoloninin etkisinin araştırılması

Amaç: Bu çalışmanın amacı, insan meme kanseri (MCF-7) ve insan over epitel kanseri (OVCAR-3) hücre hatlarında östradiol hemihidrat (ES) varlığında ve yokluğunda Sparstolonin B'nin (SsnB) hücre proliferasyonu ve apoptoz üzerindeki etkisini belirlemektir. Fosfoinositol-3 kinaz (PI3K), fosforile protein kinaz B (p-AKT), fosforile mTOR (rapamisinin mekanistik hedefi) sinyal proteinleri ve sfingomyelin (SM) /Seramid (CER) metabolitleri çalışma kapsamında ölçüldü. Gereç ve Yöntemler: SsnB tedavisinin anti-proliferatif etkileri çeşitli zaman ve konsantrasyonlarda değerlendirildi. Hücre proliferasyonu, Proliferatif Hücre Nükleer Antijeni (PCNA) ölçülerek belirlendi. PCNA protein miktarı ELISA ile hücresel dağılımı immünfloresan mikroskobu ile değerlendirildi. Hücrelerin canlılığını test etmek için 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difenil tetrazolyum bromür (MTT) analizi kullanılırken, CER, sfingozin-1-fosfat (S1P) ve SM miktarlarını analiz etmek için LC-MS/MS kullanıldı. Apoptozu değerlendirmek için TUNEL yöntemi kullanılırken, PI3K, p-AKT ve p-mTOR proteinlerinin seviyelerini ölçmek için immünfloresan boyama ve enzime bağlı immünosorbent testi (ELISA) kullanıldı. Bulgular: SsnB uygulaması hem estradiol varlığında hem de yokluğunda, MCF-7 ve OVCAR-3 kanser hücrelerinde hücre canlılığını önemli ölçüde azalttı, ancak sağlıklı insan fibroblastlarında toksisiteye neden olmadı. S1P, PI3K, p-AKT ve p-mTOR seviyeleri SsnB ile tedavi edilen kanser hücrelerinde kontrol gruplarıyla karşılaştırıldığında, anlamlı bir düşüş gösterdi. Ayrıca, SsnB ile kültüre edilen kanser hücrelerinde C16-C24 CER'lerin intraselüler seviyelerinde belirgin bir artış ve apoptoza yönelim oranında anlamlı bir yükselme tespit edildi. Sonuç: SsnB, hücre proliferasyonunu azaltırken, CER birikimini ve apoptozu teşvik ederken S1P, PI3K, p-AKT ve p-mTOR seviyelerini önemli derecede düşürmüştür. Anahtar Kelimeler: Sparstolonin B; CER, apoptoz, PI3K, AKT, mTOR