Mastitisli inek sütlerinden izole edilen streptokok ve stafilokok etkenlerinde genetik polimorfizmin araştırılması

1. ÖZET Bu çalışmada, Türkiye'nin doğu ve güneydoğusundaki süt sığırlarından toplanan Kaliforniya Mastitis Testi (CMT) pozitif süt örneklerinden Staphylococcus aureus (S. aureus) ve Streptococcus agalactiae (S. agalactiae) izolasyon ve identifikasyonu, koagulaz (coa) pozitif S. aureus ve CAMP-faktör (cfb) pozitif S. agalactiae izolatlannın Restriction Fragment Length Polymorphism (RFLP) ve Random Amplified Polymorphic DNA (RAPD) yöntemleri ile tiplendirilmesi amaçlandı. S.aureus için toplanan ve CMT pozitif olan süt omeWerinin (n = 700) bakteriyolojik kültüründe 367 örnekte üreme tespit edildi. Bunlar arasındaki 200 (% 28.6) örnek tür spesifik Polimeraz Zincir Reaksiyonu (PCR) ile S. aureus olarak identifiye edildi. Coa geninin PCR amplifikasyonu sonucunda 161 S. aureus izolatı coa pozitif bulundu. Coa PCR' da, izolatlann büyük çoğunluğunda (n = 135, % 83.9) moleküler uzunlukları 500-1400 bp arasında değişen tek bir bant oluşumu gözlenirken, az sayıdaki izolatta (n = 26, % 16.1) çift amplifikasyon ürünü elde edildi. Alul ve Hin61 restriksiyon enzimleriyle gerçekleştirilen coa- RFLP analizinde, sırasıyla 23 ve 22 bant profili gözlemlendi. Primer 786 ve OPS 1 1 primerleri ile yapılan RAPD yönteminde ise sırasıyla 32 ve 30 farklı profil elde edildi. Bu çalışmada ayrıca, beş farklı bölgedeki süt ineklerinden toplanan CMT pozitif süt numuneleri (n = 820) S. agalactiae yönünden incelendi. Bakteriyolojik kültürde toplam 199 örnekte üreme tespit edildi ve bunlardan 85 (%10,4) izolat hem tür spesifik PCR hem de ç/fr-PCR ile S. agalactiae olarak identifiye edildi. 1Amplifîye edilen cfb-PCR ürünlerinin AM ve 7sp509I restriksiyon enzimleriyle muamelesi sonucunda tüm izolatlarda aynı restriksiyon profilleri elde edildi. OPB 18 primeri ile yapılan RAPD yönteminde ise 18 farklı profil gözlendi. Sonuç olarak, Doğu ve Güneydoğu bölgesindeki sığır populasyonlanndan izole edilen S. aureus ve S. agalactiae suşlaraıda yüksek oranda bir genetik heterojenite olduğu tespit edildi. S. agalactiae için RAPD ve S. aureus için coa- RFLP ve RAPD yöntemlerinin, sığır orijinli S. aureus ve S. agalactiae izolatlanmn tiplendirilmesinde konvansiyonel yöntemlere karşı iyi bir alternatif olarak kullanılabileceği kanısına varıldı. Ayrıca bu çalışmadan elde edilen verilerin, Stafilokokal ve Streptokokal mastitislere karşı etkili kontrol ve tedavi stratejilerinin (predominant suşlar kullanılarak yeni aşıların geliştirilmesi ve etkili antibiyotiklerin seçimi gibi) geliştirilmesine ve bunun sonucunda mastitislerin insidensinde azalmalar sağlanmasına yardımcı olacağı düşünülmektedir. Anahtar Kelimeler: Sığır, Mastitis, S. aureus, S. agalactiae, PCR, RFLP, RAPD.