Meme kanseri ve kök hücre kültürlerinde Thioridazine'in etkilerinin araştırılması

Çalışmanın amacı, meme kanseri (MDA-MB-231, MCF-7) ve meme kanseri kök hücre kültürlerinde (CD44+/CD24-) antipsikotik Thioridazine'in (THZ) sitotoksik etkisini araştırmak ve bunun hangi ölüm çeşiti aracılığıyla gerçekleştiğini belirlemektir. İkinci amacı ise; THZ'nin epitelyal-mezenkimal geçişte rolünün olup olmadığını ortaya çıkarmaktır. THZ (1-30 μM, 24 saat) ile muamele edilen hücrelerin canlılık yüzdeleri XTT testi ile ölçüldü. IC50 değerleri Calcusyn 2.1 programında hesaplandı. THZ'nin, hücreye alınma yolunun doğrulanmasında, dopamin aktivatör transportlara spesifik bir inhibitör olan Threo-methylphenidate hydrochloride (TMH) kullanıldı. Apoptozis, ELISA kit ve Annexin V/7-AAD; otofaji ise LC-3 I/II ve Beclin-1 protein ifade düzeylerinin western blot yöntemiyle ölçülmesiyle araştırıldı. Otofajik vakuollerin floresan mikroskobunda gösterilmesinde Monodansylcadaverine boyası kullanıldı. Epitelyal-mezenkimal geçişteki etkileri ise, migrasyon, invazyon ve Western blot yöntemleri ile araştırıldı. THZ'nin IC50 değerleri 9±1.2 µM (MDA-MB-231, 24. saat), 16.4±1.8 µM (MCF-7, 24. saat), ve 18.1±2.3 µM (CD44+/CD24-, 24. saat) olarak bulundu. DR2'nin bazal ifade düzeyleri [(MDA-MB-231, 111.6±2 ng/mL), (MCF-7, 86.5±1.4 ng/mL), (CD44+/CD24-, 52±2.3 ng/mL)] ile IC50 değerleri arasında anlamlı bir ilişkinin olduğu saptandı. TMH ile inhibe edilen hücre hatlarına, THZ uygulandığında sitotoksik etkinin azaldığı gözlendi (p<0.05). THZ aracılı apoptozis yüzdeleri MDA-MB-231 için %10.8, MCF-7 için %30 ve CD44+/CD24- için %46.8 olarak bulundu. MCF-7 ve CD44+/CD24- hücrelerinde apoptozis saptanırken, MDA-MB-231 hücrelerinde otofaji saptandı. THZ'nin IC50 konsantrasyonlarına ait invazyon potansiyeli MCF-7, CD44+/CD24- ve MDA-MB-231 hücre kültürlerinde sırasıyla, %29, %24, %16.5 olarak belirlendi. Migrasyon potansiyeli MCF-7, CD44+/CD24- ve MDA-MB-231 hücre kültürlerinde sırasıyla, %28.5, %63.2, %61 olarak belirlendi. Her üç hücre kültürü arasında MDA-MB-231 hücrelerinin diğerlerine göre daha yüksek oranda invazyon ve migrasyon kapasitesine sahip olduğu gösterildi. THZ E-kaderin, Sitokeratin-18, β-Catenin proteinlerinin ifade düzeyini arttırırken, N-kaderin, Vimentin, Fibronektin proteinlerinin ifade düzeyini azalttı. Immunositokimya yöntemi ile de doğrulandığında, E-kaderin proteini artış gösterirken, Vimentin proteininin ifade düzeyinde yine azalma gözlendi. Bu çalışmada meme kanseri ve kanser kök hücrelerinde THZ'nin sitotoksik etkisinin iki farklı ölüm çeşidi ile gerçekleştiği ortaya çıkarıldı. THZ'nin epitelyal-mezenkimal geçişi baskıladığı bağımsız yöntemlerle test edilerek gösterildi. Sonuç olarak, in vitro hücre kültürlerinde THZ'nin sitotoksik ve anti-metastatik özellikleri ile meme kanseri tedavisinde potansiyel bir ajan olabileceği gösterildi.