Nöroblastom Mycn amplifikasyonunda C-myb protein kümesi ile Cdt1/Geminin, P53, Siklin A/Cdk2, P21 ve P27' nin rolü

Nöroblastom, periferal sinir sisteminden köken alan çocukluk çağı solid tümörleri arasında en sık görülen tümördür. MYCN geni amplifikasyonu nöroblastom tümörünün prognozunu kötü yönde etkiler. MYCN amplifikasyonunun nasıl oluştuğu tam olarak bilinmemektedir. Gen amplifikasyonları insan kanserlerinde tümöral bir davranışın sonucu olarak oluşabilmektedir. Diğer organizmalarda da gen kopya sayısı artışı meydana gelebilir. Drosophila melanogaster`in, normal gelişimsel sürecinde chorion genlerinin kopya sayısı, amplifikasyon kontrol elemanı (ACE3) dizisine bağlanan myb protein kümesi ile düzenlenir. Chorion amplifikasyonunu indükleyen kümede myb ve E2F1, baskılayan kümede myb, E2F2 ve l(3)mbt proteinleri yer alır. Drosofila`da genel genomik amplifikasyonda ise DUP ve geminin rol alır. Bu tez çalışmasında da myb benzeri bir protein kümesinin MYCN geni amplifikasyonunu kontrol edebileceği öngörülerek MYCN amplifiye Nöroblastom hücre hatlarında, Drosofila`da tanımlanmış proteinlerin insan ortologları c-myb, b-myb, a-myb, E2F1, HL3MBTL ve hCdt1/gemininin rolleri araştırıldı. Kelly, IMR32, MHH-NB-11 ve SIMA hücre hatlarında; c-myb, HL3MBTL, E2F1, hCdt1, p21, geminin, b-myb ve kontrol olarak EGFP`ye özgül shRNA`ları içeren plazmid vektörlerle RNA susturulması gerçekleştirildi. Susturma öncesinde ve sonrasında MYCN, c-myb, HL3MBTL, E2F1, hCdt1, p21, geminin, b-myb ve referans HPRT1`in mRNA düzeyleri ve MYCN ile referans p53 genleri DNA kopya sayısı oranları gerçek zamanlı PCR deneyleriyle belirlendi. Sonuçta; Kelly ve SIMA`da c-myb geni mRNA`sı baskılandığında; MYCN/p53 genomik DNA kopya sayısı oranında sırasıyla %21,09 ve %104,02 düzeyinde bir artma, IMR32 ve MHH-NB-11`de ise sırasıyla %54,11 ve %78,25 düzeyinde bir azalma görüldü. Ayrıca MYCN mRNA ekspresyon düzeyi MHH-NB-11 (%66,81), SIMA (%44,44) ve IMR32`de (%37,43) azalırken Kelly`de (%27,14) arttı. Bu durumda, c-myb MYCN geni kopya sayısını Kelly ve SIMA`da azaltma yönünde, IMR32 ve MHH-NB-11`de artırma yönünde etkilemiştir. Sonuç olarak; c-myb ile MYCN amplifikasyonunun ilişkili olduğu görülmektedir. Nöroblastom tedavisinde c-myb bir ilaç hedefi olarak seçilebilir.