Poli(vinil alkol)-kalsiyum aljinat, poli(n-izopropilakrilamit)-kalsiyum aljinat kürelerine ß-galaktosidaz immobilizasyonu

Bu çalışmada, ß-galaktosidaz enzimi (EC.3.2.1.23), poli(vinil alkol)- kalsiyum aljinat (CaAlj-PVA), poli(N-izopropilakrilamit)-kalsiyum aljinat (CaAlj-P(NIPA)) kürelerine hapsetme yöntemi ve karbodimit (CDI), Nhidroksisüksinimit (NHS), karbodimit ve N-hidroksisüksinimit (CDI-NHS) ile aktifleştirilerek kovalent bağlanma yöntemiyle immobilize edildi. Serbest enzim için Michaelis-Menten sabiti (Km) ve maksimum reaksiyon hızı (Vmak) değerleri sırası ile 0,343mM, 0,0259mM.dak-1 olarak bulundu. Kovalent bağlanma ve hapsetme yöntemleriyle immobilize edilen enzimler için ise Km değerleri 0,746 mM - 4,97mM arasında değişirken Vmak değerleri 0,0049mM.dak-1 - 0,7997 mM.dak-1 aralığında bulundu. Serbest enzim, kovalent bağlanma ve hapsetme yöntemleriyle immobilize edilen enzimler için optimum pH değerleri sırasıyla 5,0; 4,5; 5,0 olarak bulundu. Serbest enzim, kovalent bağlanma ve hapsetme yöntemleriyle immobilize edilen enzimler için optimum sıcaklık değerleri sırasıyla 30 ºC, 35 ºC, 35 ºC olarak bulundu. 45 ºC'de inaktivasyon sabitleri (ki) serbest enzim için 0,0289 dak-1 iken hapsetme yöntemiyle immobilize edilen enzimler için 0,0005dak-1- 0,0135dak-1 aralığında; kovalent bağlanma yöntemiyle immobilize edilen enzimler için 0,0100dak-1-0,0216dak-1 aralığında bulundu. Serbest enzim 30 gün v sonunda aktifliğinin % 10' unu korurken hapsetme yöntemiyle immobilize edilen enzimler 70 gün sonunda aktifliğinin yaklaşık %45'ini; kovalent bağlanma yöntemiyle immobilize edilen enzimler ise aktifliğinin yaklaşık %49'unu koruduğu görüldü. Hapsetme yöntemiyle immobilize edilen enzimlerin tekrar kullanım sayıları 5 ve 10 arasında değişirken kovalent bağlanma yöntemiyle immobilize edilen enzimlerin ise tekrar kullanım sayıları 56- 60 arasında olduğu ve enzim aktifliklerini %20 - %62,5 aralığında koruduğu bulundu. Enzimin tekrar kullanım sayısı, depolama ve termal kararlılığı immobilizasyon işlemi ile arttırıldı.