Salinomisin ve BnHAp yüklü doku iskelelerinin antikanserojen ve antibakteriyel etkinliğinin araştırılması

Tez kapsamında, antikanserojen bir ilaç olan salinomisin yüklü poli (laktik-ko-glikolik asit) (PLGA 65:35) nanopartiküller ile hidroksiapatite katkılanmış antibakteriyel etkinliğe sahip olan borun sinerjik etkisinin incelenmesi hedeflenmiştir. Bu amaçla salinomisin yüklü PLGA nanopartiküllerin sentezlenmesinin ardından karakterizasyon çalışmaları yapılmış ve in-vitro salım çalışmaları yürütülmüştür. Bor katkılı hidroksiapatit (BnHAp) varlığında salinomisin yüklü PLGA nanopartiküller ile hücre kültür ve bakteri kültür çalışmaları gerçekleştirilmiştir. Emülsiyon hazırlama-çözücü buharlaştırma tekniği ile %2.5 (w/v) salinomisin içeriğine sahip PLGA nanopartiküller üretilmiştir. Üretilen boş ve salinomisin yüklü PLGA nanopartiküller (PLGA-SAL) sırası ile 185.8 nm ve 187.4 nm ortalama çapa sahiptir. Sentezlenen PLGA-SAL nanopartiküllerin enkapsülasyon verimleri HPLC cihazı ile yapılan ölçümlere göre ortalama %97.4±1.87 olarak hesaplanmıştır. PLGA-SAL nanopartiküllerden fosfat tamponlu tuz çözeltisi (PBS) ortamında in-vitro salım çalışmaları yürütülmüş olup salinomisin salımı 1. saatte ani patlama etkisi göstererek %43 değerine ulaşmıştır. Kontrollü ve düzenli artış göstererek devam eden PLGA nanopartiküllerden salinomisin salımı 45. günün sonunda %100'e ulaşmıştır. Daha sonra, üretimleri sırasında yapısına PLGA-SAL nanopartiküller ve bor katkılı hidroksiapatit (BnHAp) katılan kitosan doku iskeleleri ile iskeleden salım çalışması gerçekleştirilmiş olup ilk 24 saatte ani patlama etkisi ile salinomisinin %44'ü salınmıştır. Salımın tamamlanması yaklaşık olarak 59 gün sürmüştür. Hem partikülden hem de iskeleden salinomisin salımının Hixson- Crowell salım kinetik modeline uyduğu belirlenmiştir. Çalışmaların ikinci aşamasında, MG-63 osteosarkom hücreleri ile hücre kültürü çalışmaları gerçekleştirilmiştir. Bu amaçla kontrol grubu (MG-63 hücreleri), salinomisin, boş PLGA nanopartiküller, PLGA-SAL nanopartiküller, PLGA-SAL/BnHAp ve PLGASAL/nHAp gruplarına yer verilmiştir. Hücre kültür çalışmaları süresince hücre canlılıkları canlı-ölü boyama analizi ile, hücre iskeleti organizasyonu Alexa Fluor/DAPI boyamayla ve nanopartiküllerin hücre içi alımları kristal viyole boyama yapılarak incelenmiştir. PLGASAL nanopartiküllerin optimum doz olarak seçilen 0.2 mg miktarında kullanıldığında MG- 63 osteosarkom hücrelerini apoptoza götürdüğü görülmüştür. Bununla birlikte; nHAp'ın MG-63 hücreleri üzerindeki proliferasyonu destekleyici etkileri sebebiyle BnHAp ve nHAp içeren gruplarda hücre canlılıklarının yüksek olduğu belirlenmiştir. Son olarak metisiline dirençli Staphylococcus aureus (MRSA-ATCC 43300), metisiline duyarlı Staphylococcus aureus (MSSA-ATCC 29213) ve kontrol grubu olan Staphylococcus aureus (ATCC 25923) suşları ile bakteri kültür çalışmaları yapılmıştır. Salinomisin yüklü antibiyogram disklerin yanı sıra 19 farklı antibiyogram diskin BnHAp varlığında inhibisyon alanlarındaki değişimler incelenmiştir. Disk difüzyon yöntemi (normal antibiyogram), çift disk sinerji (panç) yöntemi ve agar dilüsyon yöntemi kullanılan kültür çalışmalarında; BnHAp varlığında oluşan sinerjik etki ile SAL yüklenen antibiyogram disklerin inhibisyon alanlarında artış gözlenmiştir.