Sığır ve koyun orijinli Campylobacter jejuni ve Campylobacter coli'nin moleküler tiplendirilmesi

Bu çalışmada, insanlarda akut bakteriyel gastroenteritisin en yaygınetkenleri olarak bilinen Campylobacter jejuni ve Campylobacter coli'nin, klinikolarak sağlıklı sığır ve koyunların gayta ve iç organlarından multipleks PolimerazZincir Reaksiyonu (multipleks PCR) ile araştırılması ve izolatlar arasındakigenetik heterojenite düzeyinin Flagellin A (flaA) tiplendirme ve RandomAmplified Polymorphic DNA (RAPD) metotları ile belirlenmesi amaçlandı.Toplam 1154 sağlıklı sığırdan toplanan bağırsak içeriği, safra sıvısı,karaciğer ve gayta örnekleri Preston Zenginleştirme Buyyonu ve Preston SelektifAgara ekildi. İncelenen sığır örneklerinin 301 (%26,1)'i konvansiyonel kültürmetotları ile Campylobacter spp. olarak saptandı. Multipleks PCR ile incelenenizolatların % 59,5 (179/301)'inde C. jejuni ve % 10 (30/301)'unda C. coliidentifiye edildi. Sığır karaciğer örneklerinin hiçbirinde C. jejuni ya da C. colitespit edilemedi. Campylobacter jejuni ve C. coli olarak identifiye edilen izolatlar,flaA geninin 1,7 kb amplikon bölgesinin Restriction Fragment LengthPolymorphism (RFLP) analizi (flaA tiplendirme) ve 10-mer primerini esas alanRAPD yöntemi ile tiplendirildi. Bütün izolatlar flaA tiplendirme yöntemi ilebaşarılı bir şekilde tiplendirilmesine rağmen, gayta ve bağırsak içeriğinden izoleedilen C. jejuni suşlarının RAPD analizi neticesinde verimli sonuçlar eldeedilemedi. Sığırlarda, flaA tiplendirme ve RAPD metodu ile sırasıyla 28 ve 42bant profili tanımlandı.Bu çalışmada, 610 sağlıklı koyundan toplanan bağırsak içeriği, safra sıvısıve gayta örnekleri de C. jejuni ve C. coli yönünden incelendi. Konvansiyonelkültür metotları neticesinde incelenen koyun örneklerinin 302 (% 49,5)'sindeCampylobacter spp. izolasyonu gerçekleştirildi. Multipleks PCR analizineticesinde izolatların % 34,1 (103/302)'inde C. jejuni ve % 33,1 (100/302)'indeC. coli identifiye edildi. Campylobacter jejuni ve C. coli olarak identifiye edilenizolatlar, flaA tiplendirme ve RAPD yöntemi ile başarılı bir şekilde tiplendirildive sırasıyla 48 ve 45 bant profili elde edildi.Sonuç olarak, sığır ve koyunlardan elde edilen C. jejuni ve C. coliizolatları arasında yüksek bir genetik heterojenitenin mevcut olduğu ve bazı bantprofillerinin diğer profillere göre daha dominant olduğu gözlendi. Ayrıca bu tezçalışmasından elde edilen veriler, C. jejuni ve C. coli'nin çevreyi ve gıda zincirinikontamine etmesinde sığır ve koyunların önemli role sahip olduklarını ve buhayvanların Campylobacter infeksiyonlarının epidemiyolojinde göz önündebulundurulması gerektiğini ortaya çıkarmıştır.Anahtar Kelimeler: Sığır, koyun, C. jejuni, C. coli, multipleks PCR,RFLP, RAPD.