Anacardiaceae ailesinden (Pistacia vera L. cv. Siirt) Lipaz enzimlerinin saflaştırılması ve karakterizasyonu

Lipazlar, lipitlerin ester bağlarının hidrolizini katalizleyen, birçok canlıda trigliseridlerin (gıdasal lipitlerin)sindirim, taşınım ve işleniminde önemli rol alan hidroliz reaksiyonlarının yanı sıra esterifikasyon ve transesterifikasyon reaksiyonlarını da katalizleme yeteneğine sahip olan esterazların bir alt sınıfı enzimlerdir. Lipazlar, kimyasal sentezi ve ayrıştırılması zor özel bileşiklerin üretimi ve ayrıştırılması, geniş spektrumlardaki substratları kullanabilme yeteneklerine sahip oluşları, hidrolitik reaksiyon katalizinde kofaktöre gereksinim duymamaları, yan ürün oluşumunu engellemeleri gibi özelliklerinden dolayı son yıllarda biyolojik, endüstriyel, vs… gibi kullanım alanları giderek artmaktadır. Bu çalışmada alternatif bir kaynak olarak siirt fıstığı tohumundan lipaz enziminin saflaştırılması ve karakterizasyonu hedeflenmiştir. Siirt fıstığı tohumundan lipaz enzimi saflaştırabilmek için; siirt fıstığı tohumlarının proteinleri yağsızlaştırılarak amonyum sülfat çöktürmesi, diyaliz ve jel filtrasyon kromotografisi metodları kullanılarak siirt fıstık tohumları lipazı saflaştırılmaktadır. Her basamakta Bradford metoduna göre protein tayini, jel filtrasyon yöntemiyle sephadexG-100 jelinde saflaştırılmış, titrimerik metod lipaz aktivite tespiti yapılmış ve spesifik aktivite hesaplanmıştır. Elde edilen enzimlerin saflığının tespiti için aktivite ve elektroforez (SDS-PAGE) tayini yapılmıştır. Yapılan işlemler sonucunda antepfıstığı tohumu lipazının 1,97 kat saflaştırılmış olduğu tespit edilmiştir. Siirt fıstığı tohumundan saflaştırılan enzim en yüksek aktiviteyi 45°C optimum sıcaklıkta ve optimum pH 8,8'de göstermektedir. Ayrıca stabil sıcaklık 45°C ve stabil pH 8,4 olarak tespit edilmiştir. Siirt fıstığı tohumundan elde edilen lipaz enziminin depo kararlılığını tespit etmek için, 120 saat süreyle aktivite ölçümleri yapılmıştır. Enzim aktivitesinin 120 saat sonunda 45°C de korunduğu gözlemlenmiştir. Triolenin substratı kullanılarak antep fıstığı tohumu lipazının Km ve Vmax değerleri hesaplanmıştır. Vmax 15,60 U/dk. mg ve Km 0,078 Mm enzim olarak hesaplanmıştır.