Anoxybacillus flavithermus 2641t α-amilaz ve α-glukosidazının (oligo (1-6), (1-4) glukosidaz) ekpresyonu, karakterizasyonu, clea metodu ile immobilizasyonu

α-Amilaz ve α-glukosidaz, Glikozit hidrolazın temsilcilerindendir. Bu tez kapsamında, Anoxybacillus flavithermus 2641T α-amilaz ve α-glukosidaz genlerinin klonlanması, ekspresyonları, rekombinant olarak üretilen enzimlerin biyokimyasal karakterizasyonları ve CLEA yöntemi ile immobilizasyonları yapıldı. α-Amilaz ve α-glukosidazın doğal PAGE ve zimogram analizleri yapılarak, optimum pH, optimum sıcaklık ve kinetik parametreleri belirlendi. Toprak alkali metaller, alkali metaller, potansiyel inhibitörler, iyonik ve non-iyonik deterjanların, organik çözücülerin α-amilaz ve α-glukosidaz üzerine etkileri araştırıldı. α-Amilazın, substrat olarak patates nişastası varlığında optimum pH'sı 6,0-8,0 aralığında bulundu. Enzimin optimum sıcaklığı 70 °C olarak belirlendi. Patates nişastası için, α-amilazın Lineweaver-Burk eğrisi ile Km değeri 1,14 mg/ml, Vmax değeri 31 U/mg olarak belirlendi. α-Glukosidazın substrat olarak pNPG varlığında optimum pH'sı 6,0-8,0 aralığında, optimum sıcaklığı ise 60 °C olarak belirlendi. Çapraz bağlı enzim agregatları (CLEA) metodu kullanılarak enzimlerin ayrı olarak ve birlikte immoblizasyonu yapıldı. İmmobilize α-amilazın da karakterizasyonu yapılarak, optimum pH'sı 8,0-9,0, optimum sıcaklığı 70 °C, Km ve Vmax değerleri sırası ile, 0,94 mg/ml ve 35 U/ml olarak belirlendi. İmmobilize α-glukosidaz için optimum sıcaklık 55 °C, optimum pH 6,0-8,0 ve Km ve Vmax değerleri sırası ile 0,66 mM ve 811 U/mg olarak belirlendi. Birlikte immobilize edilen enzimler için optimum sıcaklık 55 °C, optimum pH 7,4 olarak belirlendi.