Theses supervised by Prof. Dr. Ali Osman Beldüz
13 theses · Karadeniz Technical University
Thermus Scotoductus K6' Dan İzole Edilen Yeni, Kriptik, Küçük, Çok Kopyali Bir Plazmitin (pHIG22) Fonksiyonel Analizi
Bu çalışmada, Thermus scotoductus K6 bakterisinden izole edilen ve tanımlanan, 2222 bp uzunluğunda,yeni, kriptik, küçük, çok kopyalı, çift zincir, % 62,78 GC içerikli yeni bir plazmit (pHIG22) karakterize edildi ve fonksiyonel analizi yapıldı. pHIG22 plazmitinin 387. bazı ile 614. bazı arasında kalan 2012 bp'lik bölgenin replikasyondan sorumlu minimal replikonu olduğu belirlendi. TEM analizleri ile plazmitin "Teta" tip replikasyon moduna sahip olduğu, replikasyon orijininin 46. baz ile 239. baz (BamHI kesim bölgesi '0' noktası kabul edildiğinde ve ters oryantasyonda) arasındaki bölge olduğu tespit edildi. pHIG22'nin her iki zincirinden transkript kodlandığı belirlendi. RACE ve LACE analizleri sonucunda, Transkript 1'in 1622 bp büyüklükte (329-1950), Transkript 2'ninde 1712 bp büyüklükte (2103-329) olduğu tespit edildi. Transkriptlerin proteine dönüşüp dönüşmediğinin belirlenmesi için yapılan çalışmalarda; SDS-PAGE, Zimogram, 2D jel analizi ve MALDI-TOF/TOF analizleri sonucunda transkriptlerin herhangi bir protein kodlamadığı sonucuna varıldı. Transkriptlerin düzenleyici bölgeleri incelenerek, her iki zincirde promotör diziler olduğu belirlendi. E.coli suşlarında replike olmadığı belirlenen pHIG22'nin T. scotoductus K6 bakterisindeki kopya sayısı Real-time qPCR tekniği ile 148 olarak hesaplandı. pHIG22 minimal replikonu ve farklı DNA parçaları kullanılarak, E.coli-Thermus suşlarında replike olabilen pUCHIGK shuttle klonlama vektörü ve pHIGKE2 shuttle ekspresyon vektörü dizayn edildi.
Lakkazın kızılçam kraft ve atık kağıt hamuru üzerindeki etkilerinin araştırılması
Lakkaz enzimi,kofaktör olarak oksijen molekülünü kullanarak fenolik bileşikleri oksitleyen ve sonunda serbest radikaller üreten bir enzimdir. Ayrıca katalitik bölgesi, çok iyi korunmuş olan üç tip bakır merkezi içerir.Diğer avantajları arasındaher türlü ortamda çok çeşitli organizmalarda bulunabilirliği ve geniş substrat aralığına sahip oluşu yer alır. Bu avantajları sebebiyle lakkaz, endüstrininçeşitli alanlarında kullanılmaktadır. Bu çalışmadabakteriyal kaynaklı bir lakkaz enziminin, kağıt hamurunun ağartılmasındaki etkilerinin araştırılması amaçlanmıştır. Kağıt hamuru uygulamalarından evvel, lakkaz, pMA0911 vektörüne klonlandı, Bacillus subtilis WB800 hücresine transforme edildi ve ekspresyonu yapıldı. Optimum sıcaklığı 60ºC ve optimum pH'sı 4,5 olarak belirlendi ve enzim Kızılçam ağaçlarından elde edilen Kraft hamuruna ve atık kağıt hamuruna uygulandı. Kızılçam Kraft ve atık kağıt hamuru uygulamaları için, ağartma çalışmaları yapıldı. Degredasyon zonu, degredasyon oranı ve delignifikasyon dereceleri analiz edildi. Atık kağıdının delignifikasyon derecesi %5,15 kızılçam Kraft hamurununki ise %5,5 olarak belirlendi. Enzim uygulanan kağıtlara yırtılma, çekme, patlama indisi, gramaj, kalınlık, yoğunluk, kopma uzunluğu ve hacimlilik gibi fiziksel testler, ve optik testleri yapıldı. Lakkaz enzimi uygulamaları sonrasında, kağıdın parlaklığı Kappa numarası 12,97 olarak %56,86, atık kağıtta ise %56,77 arttırdığı görüldü. Lakkazın lignini zayıflatıcı etkisi, SEM görüntüleriyle de incelendi.
Erwinia amylovora EAKKB29 izolatının harpin geninin klonlanması ekspresyonu ve altındane ekmeklik buğday (Triticum aestivum L.) fideleri üzerinde etkilerinin araştırılması
Harpin doğal olarak meydana gelen bakteriyel içerikli bir proteindir. Bitkinin doğal savunma mekanizmasını harekete geçiren harpin, ilk defa bakteriyel patojen olan Erwinia amylovora'dan izole edilmiştir.Bu çalışmada, Erwinia amylovora EAKKB29 hrpN geninin klonlanmasını, gen ürününün izolasyonunu ve Triticum aestivum bitkisi üzerine etkilerini konu almaktadır. hrpN geninin 1200 nt' lik baz dizini belirlenerek, pET-28a(+) ve pET-20b(+) vektörlerine klonlandı. Gen, E.coli BL21 hücresinde, ekspres edildi ve saflaştırıldı. Harpin proteininin moleküler ağırlığı 40 kDa olarak tespit edildi. Saflaştırılan HrpN(Ea)E, HrpN(Ea)E-His, HrpN(Ea)I ve HrpN(Ea)I-His proteinlerinin Triticum aestivum bitkisinin yaprak ve kök uzunluğuna, bitkinin kuru ve yaş ağırlığına etkileri araştırıldı. HrpN(Ea)I proteininin Triticum aestivum bitkisinde en iyi etkiyi gösterdiği belirlendi. Triticum aestivum fideleri üzerine en etkili konsantrasyonun 300 μl (4,5 μg) olduğu, 900 μl (13,5 μg)' den sonraki konsantrasyonlarda ise etkinin azaldığı tespit edildi.
Thermus sp. K6' dan yeni, kriptik, küçük, çok kopyalı bir plazmitin (pHIG22) izolasyonu ve kısmi karakterizasyonu
Bu çalışmada, Alangüllü (Aydın) Kaplıcası'ndan alınan su ve çamurlu su örneklerinden izole edilen iki izolatın cins tayini yapılmıştır. Thermus cinsine ait olduğu belirlenen 2 bakteriden plazmit izolasyonu yapılmıştır.Thermus sp. K6 ve Thermus sp. M5 olarak adlandırılan iki izolattan yapılan plazmit izolasyonu sonucu Thermus sp. K6 bakterisinden izole edilen plazmitin tüm baz sırası elde edildi. İzole edilen plazmitin 2222 bp büyüklükte, %63 GC içeriğine sahip, çok kopyalı, cryptic bir plazmit olduğu belirlendi. İlk kez tanımlanan bu plazmit pHIG22 olarak adlandırıldı.pHIG22 için yapılan BLAST araştırmaları sonucunda, GenBank'ta herhangi bir plazmit veya diziye benzerlik elde edilemedi. Yapılan biyoinformatik analizler sonucunda; genom üzerinde muhtemel 5 ORF bölgesi belirlendi. Belirlenen ORF'lerden; 426 bp olan ORF-1 ve 741 bp olan ORF-2 ana zincirde, 696 bp olan ORF-3, 387 bp olan ORF-4 ve 741 bp olan ORF-5'in de tamamlayıcı zincirde olduğu belirlendi. Yapılan promotor analizi sonucu pHIG22'nin tamamlayıcı zincirinde 2 promotor bölge tespit edildi.pHIG22, pUC18 klonlama vektörü ve kanamisin kaseti birleştirilerek E.coli-Thermus shuttle vektörü oluşturuldu. pHIG22 genomundan belirli diziler PCR ile çoğaltılarak pET28a+ vektörüne klonlandı. Oluşturulan rekombinant plazmitler ile termofilik bakterilere transformasyon çalışmaları yapıldı.
İzmir ve Aydın illerindeki bazı kaplıcalardan izole edilen termofilik bakteri izolatlarının moleküler taksonomisi ve D1021 izolatının glukoz izomerazının karakterizasyonu
Termofilik ortamlar, endüstriyel öneme sahip çeşitli enzimleri üreten termofilik organizmaları barındıran zengin kaynaklardır. Bu çalışmada, Karakoç Kaplıcası, Kaynarca Kaplıcası, Nebiler Kaplıcası, Alangüllü Kaplıcası, Çamköy Çamur Ilıcası ve Aydın Germencik Ömerbeyli Jeotermal sahasından su ve çamurlu su örneklerinden termofilik bakteri izolasyonları gerçekleştirildi. Geobacillus (12 izolat), Anoxybacillus (18 izolat), Brevibacillus (9 izolat), Thermus (5 izolat), Aneurinibacillus (4 izolat) ve Pseudoxanthomonas (1 izolat), Schlegelella (1 izolat) ve Chelatococcus (1 izolat) cinslerine ait izolatların tür seviyesinde sistematikleri yapılmaya çalışıldı. İzmir Kaynarca kaplıcasından izole edilen D1021 izolatın, Anoxybacillus cinsine ait yeni bir tür olduğu belirlendi ve A. kaynarcensis D1021T olarak adlandırıldı. Ayrıca yapılan genotipik analizler sonucunda, yeni tür olma potansiyeline sahip yeni Brevibacillus spp. ve Geobacillus spp. elde edildi. Bu çalışmada ayrıca, A. kaynarcensis D1021T glukoz izomeraz geninin tüm baz dizilimi belirlendi ve pET28a(+) ekspresyon vektörüne klonlandı, üretilip kolon kromatografisi yöntemiyle saflaştırıldı. A. kaynarcensis D1021T GI'sı optimum 80 °C'de ve pH 7,0'de çalışan termofilik bir enzimdir. Enzimin Km'si 101,75 mM Vmax'ı ise 14,06 ?mol/dk/mg protein olarak bulundu.
Anoxybacillus gonensis g2 çift mutant w137f/v184s ve w137f/v184t ksiloz izomerazlarının saflaştırılması ve karakterizasyonu
Bu çalışma, Gönen Kaplıcası'ndan izole edilmiş olan termofilik A. gonensis G2 suşuna ait Ksiloz İzomeraz (KI) W137F/V184S ve KI W137F/V184T çift mutasyonlu enzimlerin saflaştırılmasını ve karakterizasyonunu kapsamaktadır. KI W137F/V184S için; Km= 91,13 ± 10,54 mM; Vmax= 31,71 ± 1,1 µmol/dk/mg protein; Kcat/Km = 1,161 olarak bulundu. KI W137F/V184T için ise; Km= 25,94 ± 3,73 mM; Vmax=7,66 ± 0,37 µmol/dk/mg protein; Kcat/Km = 0,985 olarak hesaplandı. KI W137F/V184S ve KI W137F/V184T için optimum sıcaklık 85°C, optimum pH 7,5 olarak belirlendi. KI W137F/V184S 70°C'de yarım saatten sonra aktivitesini hızlı bir şekilde kaybetmiştir. KI W137F/V184T ise aktivitesinin yarısını 80°C'de yarım saatte kaybetmiştir. KI W137F/V184S'nin en iyi pH 8'de kararlı kaldığı, KI W137F/V184T'nin ise, yüksek pH değerlerinde (pH 8 - 9,5) kararlı kaldığı görüldü. KI W137F/V184S'nin en yüksek aktivitesi 10 mM Mg+2 varlığında gözlendi. KI W137F/V184T'nin ise, en yüksek aktivitesi 10 mM Mn+2 varlığında gözlendi. Ca+2, Hg+2, Ni+2, Zn+2, Fe+2 ve Cu+2 bivalent metal iyonlarının her iki mutant KI üzerinde inhibitör etki gösterdiği belirlendi.Anahtar kelimeler: Anoxybacillus gonensis, D-ksiloz izomeraz, mutasyon, enzim saflaştırması, enzim karakterizasyonu
Bazı propolis fenoliklerinin HIV-1 revers transkriptaz ile moleküler interaksiyonu: moleküler docking (kenetlenme) çalışması
HIV'in neden olduğu AIDS, dünya çapında yaygın olup insan bağışıklık sistemini baskılayarak, vücudu enfeksiyonlara karşı savunmasız bırakmaktadır. Standart antiretroviral ilaçlara karşı HIV-1 direnci görülme sıklığı artmakta ve şu anda kullanımda olanlardan daha az toksik ve ucuz ajanlara ihtiyaç duyulduğundan, doğal ürünler arasından yeni tedaviler aranmaktadır. Aranan bu tedaviler arasında, propolisin antiviral özelliği (Gekker vd., 2005) ve Revers transkriptaz inhibitörü olma özelliği ona olan ilgiyi arttırmaktadır. Bu yüzden, dünyada büyük bir sorun olan HIV-1'in tedavisinde propolis iyi bir aday olarak karşımıza çıkmaktadır. Bu çalışmada, tasarlanan ligandlar filtrelenerek ilaç olma özelliğine sahip olabilecek propolisin yapısında bulunan sekiz fenolik madde ligand olarak Autodock4 programı ile bir RT kristal yapısı olan 3qip.pdb yerleştirildi. Yerleştirme sonucunda CAPE (Caffeic acid phenetyl ester) ligandı -8,65 kcal/mol'lük skor ile RT enzimine en iyi bağlanan ligand olarak belirlendi. Diğer yedi ligandın da enzim için iyi yerleşme skorları verdiği gözlendi. Sonuç olarak HIV-1 revers transkriptaz için inhibitör adayı olan yeni ligandların tasarımı gerçekleştirildi. Daha önceki çalışmalarda etki mekanizması çoğunlukla virüsün hücre içine girişini bloke etmeye yönelik iken (Harish vd., 1997), bizim çalışma hedefimizin ise HIV-1 Revers transkriptaz enziminin inhibisyonuna yönelik olmasıdır. Dolayısı ile hedeflediğimiz yön itibariyle yenilikçi ve ümit vaat edicidir.
Jantinobacterium sp. suşlarının viyolasin pigmentlerinin antiviral, antimikrobiyal ve antibiyofilm özelliklerinin araştırılması
Bu çalışmada Jantinobacterium sp. GMG-1 ve Jantinobacterium sp. GK bakterilerinin doğal metaboliti olan Viyolasin pigmenti kaba ekstrelerinin antimikrobiyal, antiviral ve biyofilm oluşum inhibisyonu etkilerinin araştırılması amaçlanmıştır. Bu amaçla antimikrobiyal analizler için CLSI (Clinical Laboratuvary Standards Instute) mikrodilüsyon yöntemi kullanılırken, antiviral analizler için HIV-1 RT inhibisyonu ve SARS-CoV-2 Spike S1: ACE2 Biyotin inhibisyon kitleri kullanıldı. Ayrıca biyofilm oluşumu inhibisyonunun araştırılmasında Gram pozitif bir bakteri olan Enterococcus faecalis 74, E. faecalis 29212 ve E. faecalis OG1RF suşları kullanıldı. GMG-1 ve GK kaba Viyolasin ekstraktları, saf Viyolasin ve Deoksiviyolasin'in, sırasıyla 0,8 mg/ml - 0,1 mg/ml, 2-0,05 mM ve 1,5-0,5 mM konsantrasyon aralıklarında, HIV-1 RT inhibisyon oranlarında ve Spike S1: ACE2 üzerinde konsantrasyona bağlı olarak inhibisyon oranında artışa neden oldu. Ayrıca GMG-1 ve GK kaba Viyolasin ekstraktlarının (0,8- 0,1 mg/ml) E. faecalis biyofilm oluşumunu doz artışına bağlı olarak inhibe ettiği gözlendi. Sonuç olarak bu çalışma, Jantinobacterium'a ait GMG-1 ve GK suşlarından elde edilen Viyolasin'in antimikrobiyal, antiviral etkinliği olduğunu ve biyofilm oluşumunu engellediğini göstermektedir.
Anoxybacillus sp. Pdf1 lipaz geninin klonlanması, ekspresyonu ve karakterizasyonu
Lipazlar (triaçilgliserol hidrolazlar; EC.3.1.1.3) lipid-su arayüzeyinde trigliseritlerin hidrolizini katalizleyen enzimlerdir. Mikrobiyal lipazlar, deterjan, transesterifikasyon ve kiral bileşiklerin sentezlenmesi açısından endüstriyel açıdan oldukça ilgi çekmektedirler. Termofilik mikroorganizmaların lipazları sıcaklık ve kimyasal denatürasyona karşı dirençli olduklarından dolayı endüstiyel süreçlerde önemli rolleri vardır.Bu çalışma Anoxybacillus sp. PDF1 lipaz geninin klonlanmasını, gen ürününün izolasyonunu ve karakterizasyonunu konu almaktadır. PDF1 lipazını kodlayan 740 nt` lik genin baz dizilimi belirlenerek pET28a+ vektörüne klonlandı. Geni içeren vektör, E.coli BL21 hücresine aktarılarak lipaz ekspres edildi ve saflaştırıldı. Saflaştırılan lipazın maksimum aktivitesi 60ºC pH 8'de incelendi. p-nitrofenil butirat için olan 0,348 mM Km değeri ile diğer birçok lipaz enzimlerine göre daha düşük bir Km değerine sahip olduğu belirlendi. Mg+2, Li, Ca+2, K, Zn+2, ve Co+2 metal iyonlarının etkisi incelendi. PDF1 lipazının moleküler ağırlığı 28 kDa olarak tespit edildi. Elde edilen veriler ışığında, enzimin biyokimyasal özellikleri, enzimin önemli bir endüstriyel enzim olabileceğini göstermektedir.
Anoxybacillus gonensis glukoz izomerazının genetik manipulasyonlarla bazı biyokimyasal özelliklerinin geliştirilmesi
Glukoz izomeraz (D-ksiloz ketol izomeraz; EC 5.3.1.5), büyümek için karbon kaynağı olarak ksilozu kullanabilme yeteneğine sahip, birçok bakteride bulunan hücre içi bir enzimdir. Glukoz izomeraz, D-ksilozun D-ksiluloza dönüşümünü katalizlediği gibi D-glukozun D-fruktoza dönüşümünü de katalizlemektedir. Bu ikinci özelliği HFCS (fruktoz şurubu) üretiminde endüstriyel alanda kullanılmaktadır. Glukoz izomeraz bugün dünyada ticari amaçla en çok kullanılan üç enzimden biridir.Bu çalışmada, Anoxybacillus gonensis G2T glukoz izomeraz geni klonlanarak izole edildi ve baz dizilimi belirlendi. İzole edilen gen, pET-28a(+) ekspresyon vektörüne klonlanarak E. coli BL21(DE3) suşu içerisinde yüksek miktarlarda üretildi. Bütün glukoz izomerazlar, amino asit dizilimleri açısından, oldukça korunumlu bazı bölgelere sahiptirler. Bu bölgeler incelenerek, bölge özgün mutasyon yöntemiyle, klonlanan glukoz izomeraz üzerinde W137F, V184T, V184S, H99Q, H99N, H99D, H99E ve H99L mutasyonları yapıldı. Yaban tip ve mutant enzimler kolon kromatografisi yöntemiyle saflaştırıldı ve karakterize edildi. Tüm mutant enzimler yaban tip enzim ile biyokimyasal özellikleri ve kinetik parametreleri bakımından karşılaştırıldı.Yaban tip enzimin optimum pH'sı 6,5, optimum sıcaklığı 85°C, Km'si 146,08 ± 9,50 mM ve Vmax'sı ise 43,72 ± 1,01 µmol/dk/mg protein olarak belirlendi. Yapılan W137F mutasyonu ile Km değeri 64,02 ± 2,10 mM'a düşürüldü. V184T, V184S mutasyonları enzim kinetik parametrelerinde önemli bir değişiklik meydana getirmezken genel olarak H99 ile yapılan mutasyonlar sonucu enzimin Km değerinde bir artış Vmax değerinde ise bir azalış gözlendi. Yapılan W137F/ V184S mutasyonu ile Km değeri 39,29 ± 2,87 mM'a düşürüldü.
Jiangella aurantiaca enkapsülin sisteminin klonlanması, ekspresyonu ve karakterizasyonu
Enkapsülinler, kendilerine özgü kargo proteinleri bulunan, doğal, bakteri kaynaklı ve protein yapılı kapsüllerdir. Bu çalışmada, Jiangella aurantiaca 8K307'nın peroksidaz-enkapsülin sistemi karakterize edildi. Ayrıca, enkapsülinle ilişkisiz Anoxybacillus ayderensis A9'in oligo-1,6-α-glukosidazına, Dyp'ye ait olan kargo yükleme peptidi (CLP) eklenerek, enkapsülinin oligo-1,6-α-glukosidaz üzerindeki etkileri araştırıldı. Enkapsülin, Dyp, oligo-1,6-α-glukosidaz ve CLP etiketli oligo-1,6-α-glukosidaz genleri, rekombinant olarak üretildiler ve gen ekspresyonlarının ardından saf olarak elde edildiler. Enkapsülinin TEM ve DLS analizleri ile 24 nm'lik kapsül yapısı belirlendi. Kapsül formun stabil olduğu fizyolojik koşullar belirlendi. Enkapsülinin, Dyp ve CLP etiketli oligo-1,6-α-glukosidaz ile in vitro kapsülasyonları sağlandı. Zimogram ve Native PAGE analizleri ile kapsülasyonlar tespit edildi. Enkapsülinlenen ve serbest Dyp, enkapsülinlenen ve serbest oligo-1,6-α-glukosidaz ve CLP etiketi bulunmayan oligo-1,6-α-glukosidazın, optimum pH, optimum sıcaklık ve kinetik parametreleri belirlendi. Sürfaktanlar, metal şelatörler, indirgeyici ajanlar, organik çözücüler ve metallerin Dyp, oligo-1,6-α-glukosidaz ve CLP etiketi bulunan oligo-1,6-α-glukosidaz üzerindeki etkileri test edildi. Sonuçta, enkapsülinin özel kargo proteini olan Dyp ve ilişkisiz kargo proteini olan oligo-1,6-α-glukosidaz üzerindeki koruyucu etkileri ayrıntılı olarak karakterize edildi
Anoxybacillus flavithermus 2641t α-amilaz ve α-glukosidazının (oligo (1-6), (1-4) glukosidaz) ekpresyonu, karakterizasyonu, clea metodu ile immobilizasyonu
α-Amilaz ve α-glukosidaz, Glikozit hidrolazın temsilcilerindendir. Bu tez kapsamında, Anoxybacillus flavithermus 2641T α-amilaz ve α-glukosidaz genlerinin klonlanması, ekspresyonları, rekombinant olarak üretilen enzimlerin biyokimyasal karakterizasyonları ve CLEA yöntemi ile immobilizasyonları yapıldı. α-Amilaz ve α-glukosidazın doğal PAGE ve zimogram analizleri yapılarak, optimum pH, optimum sıcaklık ve kinetik parametreleri belirlendi. Toprak alkali metaller, alkali metaller, potansiyel inhibitörler, iyonik ve non-iyonik deterjanların, organik çözücülerin α-amilaz ve α-glukosidaz üzerine etkileri araştırıldı. α-Amilazın, substrat olarak patates nişastası varlığında optimum pH'sı 6,0-8,0 aralığında bulundu. Enzimin optimum sıcaklığı 70 °C olarak belirlendi. Patates nişastası için, α-amilazın Lineweaver-Burk eğrisi ile Km değeri 1,14 mg/ml, Vmax değeri 31 U/mg olarak belirlendi. α-Glukosidazın substrat olarak pNPG varlığında optimum pH'sı 6,0-8,0 aralığında, optimum sıcaklığı ise 60 °C olarak belirlendi. Çapraz bağlı enzim agregatları (CLEA) metodu kullanılarak enzimlerin ayrı olarak ve birlikte immoblizasyonu yapıldı. İmmobilize α-amilazın da karakterizasyonu yapılarak, optimum pH'sı 8,0-9,0, optimum sıcaklığı 70 °C, Km ve Vmax değerleri sırası ile, 0,94 mg/ml ve 35 U/ml olarak belirlendi. İmmobilize α-glukosidaz için optimum sıcaklık 55 °C, optimum pH 6,0-8,0 ve Km ve Vmax değerleri sırası ile 0,66 mM ve 811 U/mg olarak belirlendi. Birlikte immobilize edilen enzimler için optimum sıcaklık 55 °C, optimum pH 7,4 olarak belirlendi.
Geobacillus stearothermophilus triaçilgliserol lipazının (GstLipC) katalitik etkinliğinin artırılması ile biyolojik ındikatörün iyileştirilmesi
Geobacillus stearothermophilus sporları, yüksek sıcaklığa karşı dirençli olup, sterilizasyon süreçlerinde biyoindikatör olarak kullanılmaktadır. Söz konusu sporların çimlenmesi, enzimlerin sıralı aktivasyonu ile ilerleyen yüksek derecede düzenlenmiş bir biyolojik süreçtir ve bu süreçte çeşitli proteinlerin önemli işlevler üstlendiği bilinmektedir. Bu çalışmada, Geobacillus stearothermophilus'ta bulunan ve spor germinasyon sürecinde kritik role sahip olan GDSL ailesi lipazının karakterizasyonu gerçekleştirildi. Elde edilen bu enzim üzerinde biyoinformatik çalışmalar ile dört farklı mutasyon çalışması yapıldı ve yaban tip GDSL lipazı ile kıyaslandı. Mutant enzimler pNW33N plazmitine klonlanarak Geobacillus stearothermophilus'a transformasyonu gerçekleştirildi. Devamında yaban tip ve rekombinant plazmiti bulunduran Geobacillus stearothermophilus için sporulasyon ve germinasyon çalışmaları gerçekleştirildi. Germinasyon kinetiği, OD600 absorbans değişimi üzerinden spektrofotometrik olarak değerlendirildi. Elde edilen bulgular, hem yaban tip hem de mutant GDSL lipazların karakterize edildiğini ve mutasyonların enzimin Km değerinde anlamlı değişimlere yol açtığını gösterdi. Ayrıca, yaban tip ve mutant sporların germinasyon süreçleri arasında belirgin farklılıklar gözlemlendi.