Antik insan ve Kuzeydoğu Anadolu step filinin (elephas trogontherii-mamut) kemiklerinde alkalen fosfataz enziminin aranması ve tanımlanması

ÖZET Bu çalışmada, alkalen fosfataz enzimi (AP) antik insan kemiklerinden total olarak ve antik fil kemiğinden bağlanma şekillerine göre dış periferal, sitozolik, iç periferal ve integral olmak üzere dört basamakta ayrı, ayrı saflaştınldı ve karakterize edildi. 3000 yıllık antik insan kemiklerinden total olarak alkalen fosfataz enzimi jel fıltrasyon ve iyon değişim kromatografisi kullanılarak saflaştınldı. Daha sonra yaşı yaklaşık olarak 300.000 ile 800.000 yıl arasında tahmin edilen Kuzeydoğu Anadolu Step Fil'inin (Elephas Trogontherii) kemiklerinden bağlanma şekillerine göre dört basamakta alkalen fosfataz izoenzimleri iyon değişim kromatografisi ile saflaştınldı. Bu izoenzimlerin aktiviteleri substrat olarak p-nitrofenilfosfat kullanılarak tayin edildi. Saflaştırılan AP izoenzimlerinin optimum pH'ları ve optimum sıcaklıkları belirlendi. Ca+ iyonunun ve tonocalsinin (kemik erimesi hastalığının tedavisinde kullanılan bir ilaç) AP aktivitesi üzerine etkisi araştırıldı. Bütün izoenzimlerin molekül ağırlıkları jel fıltrasyon kromatografisi ile belirlendi. Ayrıca Linevveaver-Burk grafikleri metodu kullanılarak bu AP izoenzimlerinin Vmax ve Km değerleri bulundu. Elde edilen bu sonuçlardan yararlanılarak antik insan kemiğinden AP enzimi ve antik fil kemiğinden elde edilen dış periferal, sitozolik, iç periferal ve integral AP izoenzimleri saflaştırılıp, karakterize edildi.